蛋白质技术

觉得是非常实用的的文章，不是泛泛而谈，详细到连如何带手套都包括在内。考马斯亮蓝染色双向电泳凝胶胶内酶切方法的改进廖翔1 应天翼1 王恒樑1 王杰2 魏开华2 黄留玉1 黄培堂1（1、军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071；2国家生物医学分析中心，北京 100085）1.2 胶内酶解制备样品用剪刀将200μl Eppendorf 吸头尖端剪掉约1cm，孔的直径约为1mm，用修剪后的吸头从凝胶上戳取蛋白质点，再转入200μl离心管中。每管加入50μ ...

1 材料和方法1.1 材料1.1.1 组织和细胞的来源：1.1.2 仪器设备机械组织匀浆器低温高速离心机 (40,000 g)超速离心机超生细胞破碎仪超纯水装置1.1.3 试剂三氯醋酸 (TCA)丙酮二硫苏糖醇 (DTT)尿素CHAPSPMSFEDTA乙醇磷酸考马斯亮蓝R350抑肽素A亮肽素试剂纯度均应是分析纯或以上。1.1.4 溶液配制(1) PBS：NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4 1.44 g, KH2PO4，溶于800 ml水中，用HCl调pH至7.4，用纯水定容至1 L；(2) ED ...

蛋白质提取与纯化技术选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场 ...

这是加拿大生物信息学会举办的蛋白组学workshop的讲义ppt一共为期5天，因为空间有限的问题我将分批贴出供大家下载,请尽快下载。注意这个空间的带宽为每月1GB，所以请尽量不要重复下载以给更多朋友机会。这是国外空间，教育网内朋友请用代理服务器。如果哪位有好的空间，请PM我，多谢。第一天Topic : 2DGESpeaker:David Wishart ProfessorDepartment of Computing Science and ...

首先我的目的就是单纯的Western,要看的是一个膜受体的表达,以前我们做的方法是:提取组织(血管),加入lysis buffer,玻璃匀浆,冰上半小时,12,000rpm离心5min,取上清,加入loading buffer, 煮沸5min,上样........ 实验室所有的人做所有的蛋白都是这个步骤.从来也没有想过选择12,000rpm是什么道理. (大概认为提取的是总蛋白),在我做的过程中,感觉Western结果很不稳定,而且每次都显示这 ...

Westernblot基本流程1.蛋白处理：此步骤是关键，蛋白处理的好否决定结果好坏。取细胞，3000rpm 3min离心，加入含蛋白酶抑制剂（现做现加）的细胞裂解液(本实验室选择RIPA，1×106/L细胞对应100ul)，枪尖反复吹吸裂解细胞（此步非常重要，容易出现鼻涕样的液体，此为裂解不充分的缘故，所以应反复吹打或者置于振荡器上，直至鼻涕状液体消失）。冰上放置至少半小时。2.煮蛋白：12000rpm，15min离心，吸取 ...

1 引言由于冻干药品呈多孔状、能长时间稳定贮存、并易重新复水而恢复活性，因此冷冻干燥技术广泛应用于制备固体蛋白质药物、口服速溶药物及药物包埋剂脂质体等药品。从国家药品监督管理局数据库得知，目前国内已有注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、注射用重组人干扰素α2b、冻干鼠表皮生长因子、外用冻干重组人表皮生长因子、注射用重组链激酶、注射用重组人白介素-2、注射用重组人生长激素、注射用A群链球菌、注射用重组人干扰素α2b ...

Isolation and Purification of Proteins 推荐言： 一本不错的书，从理论到实践，非常精彩。全书共670页，PDF格式，8.9Mb。欢迎大家下载。－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－Book Description: This publication details the isolation of proteins from biological materials, techniques for solid-liquid separation, concentrati ...

一次认为最无望的化学转化，结果长出70多个转化子。分析原因，有以下几点不同于以往的做法：我认为关键不同点是以下的2、3、4、6点，但没时间和精力去验证，希望大家给点指示。1、质粒酶切与乙醇沉淀等操作比平时长，都大于12h。2、乙醇37℃挥发3h，当时怕时间过长质粒降解了。3、热激之前的保温和热激温度都比平时高2-3℃，怀疑温度计坏了，歪打正着。以前有次转化长出40多个，温度比较恒定。这次温度又高又不恒定，由此可以排除温度是 ...

在广大站友的支持下，蛋白版日益繁荣，不断有新站友加入。同时也有一些站友对本版加分规则不大了解。特此重申加分规则如下：本版倡导，发贴能真正让提问者获益。应助的时候有时只指个方向，对初学者或发问者来说也许受益有限。版主会根据应助者的应助权重相应加分。加分规则的要点：1。分数是对站友劳动的承认，是衡量站友对丁香园贡献大小的标志之一，同时也是分享别人某些高级劳动成果的前提之一。2。本讨论版的加分的目的是公正公平、鼓励原创、 ...

在原核蛋白表达过程中，选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素：表达载体、宿主菌株、表达诱导条件,以获得最满意的表达效果。事实上，在平时的实验中，最容易被忽视的就是宿主菌的选择——多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株，或者是载体配套的菌株，而不去追究原因——即使表达结果不佳，大多在表达条件和载体上找原因，也不会考究菌株的选择是否适合。作为原核表达的宿主，对外源基因的表达会产生一定的影响，是勿庸置疑的。 ...

由于本人刚刚进入实验室，没有任何经验，不知道各位大哥能否给于指导，告知具体的实验注意点。谢谢各位大侠Cx43、Cx40蛋白表达的测定2.6.1血管组织的匀浆取血管标本100mg置玻璃匀浆器中，按100mg/ml的比例加入裂解缓冲液，4℃下手工碾磨10-15分钟至肉眼看不到组织碎片，置离心管中于4℃低温离心机以14000ram离心15分钟，取上清液分装保存在-70℃深低温冰箱备用。2.6.2 蛋白浓度的测定用Bradford ...

如何选择凝胶生物分子下游纯化的对象一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出最有效的纯化流程。1.测定------分子量、PI当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简 ...

2010年11月8日人卫社专著《实验技术中的惑与获》在丁香园招募副主编和编者：http://article.dxy.cn/bbs/topic/18694164?tpg=1&age=012月5日，第一批入选编者的名单已经公布：http://article.dxy.cn/bbs/topic/18909982?tpg=1&age=0人卫社专著《实验技术中的惑与获》招募蛋白质技术领域编者，真诚期待您的加盟！目前，各研究单位、高校和医院对科 ...

说明：本版经常有求助血清蛋白质组学的帖子，但是作为一个新学科，很少有人熟悉。故摘录此书下载链接，希望从事相关研究的战友从速下载，以免过期。 Exploring the Human Plasma Proteome形态项：Publisher: Wiley-VCHNumber Of Pages: 394Publication Date: 2006-12-22Sales Rank: 2191348ISBN / ASIN: 3527317570EAN: 9783527317578内容提要：On ...

摘要:蛋白质组研究目的在于从蛋白水平阐明基因的功能，这对于探索生命的奥秘具有重要的意义。蛋白质芯片是近年来兴起的一种强有力的高通量研究方法，能够一次平行分析成千上万的蛋白样品， 具有很高的敏感度与准确性。它将成为蛋白质组学研究中的强有力的研究方法，并最终架起基因组学与蛋白质组学的桥梁。1 　研究现状蛋白质组(proteome)是指一个基因，一个细胞或组织所表达的全部蛋白质成分。蛋白质组学研究的是在不同时间和空间发挥功能 ...

整理蛋白版2006年06月无人应助帖如下， 请广大战友积极应助，加分从优！！！请广大战友应助后到加分申诉及积分返还区跟贴申诉，谢谢。蛋白质组学讨论区：蛋白羧基酰胺甲基化后酶切的道理？？？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6330676&sty=1&tpg=4&age=0【求助】蛋白质在生物体内从产生到降解的调节机制？？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65& ...

包涵体的纯化和复性总结信息来源：本站原创　更新时间：2004-10-19 3:49:00关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂一、菌体的裂解1、怎样裂解细菌？细胞的破碎方法1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适 ...

在网上见到的一篇关于免疫沉淀的文献，较详细，现译之共享:免疫沉淀材料1，蛋白A 或蛋白G2，一抗3，免疫沉淀缓冲液：20 mM 磷酸钠, pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP40, 0.5% 脱氧胆酸钠 and 0.02% 叠氮化钠.（ NOTE: 50 mM 醋酸钠缓冲液, pH 5.0,. 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP-40 and 0.02%叠氮化钠 也可作为免疫沉淀的缓冲液，能提高蛋白G的结合功效）4，洗脱液：0.1 M 甘氨酸-HCl buffer, pH 2.55，SDS-PAGE 上样缓冲液 (pH 6.8)： 2% SDS, 62.5 mM Tris 碱, ...

Separation Methods in Proteomicsedited by Gary B. Smejkal2006年出版，目录Chapter 1Applications of Pressure Cycling Technology (PCT) in 2DGEChapter 2Applications of Ion-Exchange Chromatography (IEX) to Reduce Sample Complexity Prior to Two-Dimensional Gel Electrophore ...