蛋白质技术

酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。　　戊二醛二步法　　1.　原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。　　2.　标记步骤：　　(1)　称取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于室温静置过夜。　　(2)　反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml／1分 ...

随着ICAT的技术日趋成熟，它作为一种较新的定量蛋白组学工具越来越吸引着大家的眼球，勿庸置疑它是定量蛋白质组学的方向之一。版面上之前也有过很多的相关讨论，可以说是非常不错，没有看过的朋友可以参考：1. 由biodna超版发起的ICAT精华贴:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=408757&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=02. codegreen主任进一步的一些思考和见解: ...

References: Arnaud Mouchon, Chris Depoix, Bruno LefebvrePurpose and comments: Assay for protein:protein interaction in-vitroBl21 are generally difficult to transform, at least as purchased from Promega and sometimes fromNovagen. Do not hesitate to use 2-3 _ g DNA for 50 _ l bugs. You must have ...

wiley 九月刚刚出版的蛋白质组学 的新书。不知有人赶兴趣不！Biomedical Applications of ProteomicsPublished Online: 17 Sep 2004Editor(s): Dr. Jean-Charles Sanchez, Dr. Garry L. Corthals, Prof. Dr. Denis F. HochstrasserPrint ISBN: 3527308075 Online ISBN: 3527601562Copyright © 2004 Wiley-VCH Verlag Gm ...

虽然响应不是很积极，我还是再贴贴蛋白质的序列分析流程吧。罗嗦一句，提供的网址表示可以在该处进行免费分析。2.1 蛋白质序列的检索2.1.1 从NCBI检索蛋白质序列http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Protein2.1.2 利用SRS系统从EMBL检索蛋白质序列http://srs.ebi.ac.uk/2.2 蛋白质序列的基本性质分析(方案)2.2.1 蛋白质序列的信号肽分析htt ...

不知道大家是否清楚，我特地去查了一下原始文献，摘要中就有说明mascot中关于Iodoacetamide（碘乙酰胺） derivative的链接http://www.unimod.org/cgi/unimod.cgi?sort_field1=mono_mass&sort_field2=full_name&first_record_to_display=0&records_per_page=25&session_id=UT1DESR4 ...

重要说明：本贴公布以来得到站友积极响应，各位的切身体会和经历令大家受益匪浅。不过经过与出版社的协商，我们在后续征稿活动中对稿件的格式将有一定要求，因此我们重新公布了正式征稿帖。在本贴内跟贴的战友可以在新贴中将自己的帖子按照我们的格式要求重新编辑改写后重新投稿（请注明修改版）。或者我们也将对本贴内基本符合或者经改写后能够符合要求的稿件进行逐一审核，可能同投稿人沟通协商改写事宜，希望仍能得到您的支持和建议！本贴暂 ...

我是一个门外汉，刚刚做WB。做出来后全是模糊的片子，还有就是只有黑点，没有条带。一直没找到原因。恳请各位高人教导。并且按照以下的方法做。我做的是SD大鼠骨骼肌组织的蛋白检测，取300mg肌肉，最终加2.4ML裂解液。10000转离心10分钟。定蛋白也是按一下方法。上样按每10微升80微克蛋白上的样。用的是大连竞迈公司的垂直电泳仪。装模是半干法，按没分钟1KD转的。一抗1：1000.二抗1：6000。。 我测的蛋白在95KD ...

1.一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使band压出来也会很浅，结果也不可信。2.加一抗后最好4度过夜，保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4度也可使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化的抗体都挺贵的。二抗则室温1小时即可。3.磷酸化抗体的好坏是一个关键因素，所以要选择好的厂商。个人认为，Cell signaling公司做的磷酸化抗体不错，尤其 ...

最近做实验在选择缓冲液，在咱们论坛上搜了搜，关于缓冲液的帖子很多，大多集中在缓冲液的配制方法上，关于开始时如何选择缓冲液却很少谈及，本人整理了论坛上关于如何选择各种缓冲液的加分贴，并配以合适的题名，希望对大家能有帮助！常用缓冲液的配制方法http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5270608_1.html选择缓冲液的依据http://www.dxy.cn/bbs/actions/ ...

HUPO 3rd第三届国际人类蛋白质组大会蛋白质组学——基因组的诠释大会组织委员会主席贺福初(中国) 共同主席Samir Hanash (美国)John J.M. Bergeron (加拿大) 秘书长孙建中（中国） 副秘书长徐天昊(中国)雷霆(中国) 委员会成员John J.M. Bergeron (加拿大)杜生明(中国)Samir Hanash (美国)贺福初(中国)马林(中国)马阳(中国)Matthias Mann (丹麦)Young-Ki Paik (韩国)Emanuel Petricoin (美国)P ...

SELDI技术闲谈我总是在黑白之间徘徊，在那灰色的地带游走。一，Seldi的原理。Seldi技术，说来不复杂，ProteinChip和TOF-MS两个部分，有的专家说“蛋白质芯片”这个叫法不正确，当然了，我们以前讲的某某“芯片”是微点阵“Microarray”，不是“Chip”，翻译的问题而已。蛋白质芯片是将传统的生物色谱的表面集团固定到金属片基上，比如Q、NTA、C18这些，所以蛋白质芯片也分成了离子交换、金属螯合、正相 ...

目 录概述... 1手册的概述... 1双向(2-D)电泳概述... 1手册中使用的标记符号... 2第一向等电聚焦（IEF）的仪器选择... 3第二向SDS-PAGE电泳设备的选择... 4仪器的选择... 6等电聚焦系统的选择... 6第二向电泳的设备选择... 8MultiphorII平板型设备... 8垂直系统... 9实验室技术... 9第一章... 11样品制备... 111.0 样品制备——一般策略... 111.1 细胞破碎的方法... 131.1.1 温和的裂解方法... 131.1.2 剧烈的裂解方法... 151.2 防止蛋白质水解... 16 ...

七、八月是应助的淡季，整理蛋白版2006年07月无人应助帖如下（不包括重帖、极不规范帖和错发于版务区帖；其中无标题的不规范帖已用“...... ......."格式代为标出主要内容）， 请广大战友积极应助，加分从优！！！蛋白质组学讨论区：。【求助】各位，兄弟我要做分离纯化蛋白的研究课题，但国外有报道，但没有细节，我想做完研究生课题，这能行吗？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6707916&sty=1&t ...

与传统方式相似，重组蛋白的分离纯化也是利用其物理和化学性质的差异，即以分子的大小，形状，溶解度，等电点，亲疏水性以及与其它分子的亲和性等性质建立起来的。与此相对应的分离纯化方法参见表1。从表1可看出，当前蛋白质的纯化主要是依靠层析和电泳技术。由于重组蛋白在组织和细胞中仍以复杂混合物的形式存在，因此到目前为止还没有一个单独或一整套现成的方法把任何一种蛋白质从复杂的混合物中分离出来，而只能依据目标蛋白的物理化学性 ...

Glycovirology Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol 379)Publisher: Humana PressNumber Of Pages: 205Publication Date: 2007This volume reviews the increasing importance of glycosylation to the field of virology, as well as virus replication. The chapters provide an over ...

凝胶层析凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广，商品名是sephadex型号很多，从G10到G200，它的主要应用范围是：①分级分离各种抗原与抗体；②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片；③分析血清中的免疫复合物；④分子量的测定。（一）原理凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质， ...

http://www.helixnet.cn/bbs/thread-13191-1-1.html 高效表达外源蛋白的方法 growth-associated方法（08.11.27更新）http://www.helixnet.cn/bbs/thread-4127-1-1.html 毕赤酵母表达的一般策略第一章毕赤酵母表达的一般流程第二章毕赤酵母表达实验步骤第三章阳性重组子的初步筛选第四章对得到阳性菌株的诱导培养http://www.heli ...

曾几何时，人们还沉浸在生物技术，特别是基因操作技术带来的喜悦之中。通过向细胞转移基因，尤其是让基因进入生物体或从生物体剔除基因的确改变了细胞和生物的表型。于是，人们试图利用这些技术制备生物产品，甚至治疗人类各种疾病。但是，自从1990年第一例人类基因治疗临床试验取得成功以来，这个领域总的进展是令人沮丧的。主要的问题还是技术方面的。人们很难将转基因引入细胞和机体，更难以将它们定向地导入特定类型的细胞。即使弄了进去 ...

2009年度诺贝尔生理学或医学奖在瑞典卡罗林斯卡医学院揭晓，三位美国科学家伊丽莎白·布兰克波恩(ElizabethH.Blackburn)、卡罗尔·格雷德(Carol W. Greider)以及杰克·绍斯塔克(JackW.Szostak)共同获得该奖项。他们发现了由染色体根冠制造的端粒酶(telomerase)，这种染色体的自然脱落物将引发衰老和癌症。　　伊丽莎白·布兰克波恩来自美国加利福尼亚旧金山大学，于1948年出生于澳大利亚。 ...