蛋白质技术

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上， ...

最近做了taq酶的表达和纯化，将优化的实验流程和一点心得贴上来，希望对大家有帮助，更希望得到批评和指正TaqDNA聚合酶表达载体的构建与提取纯化1 .背景重组TaqDNA聚合酶基因及表达载体插入重组Taq DNA聚合酶基因的pET-28a表达质粒，该质粒是由美国Novagen公司推出的能在大肠杆菌中高效表达的一种质粒载体。该质粒在克隆位点前有1个T7启动子，在T7启动子前有1个6×His-Tag coding序列，是T ...

迎来金秋十月，蛋白版作为实验技术讨论区一个重要的板块，长久以来得到众多热心的战友厚爱和支持。为了答谢战友们的关心和维护，现举办九万帖有奖抓图活动，希望广大战友在这个充满激情的十月变得更加富有活力。在这里感谢大家长久以来的热心和关爱，你们才是蛋白版的支柱和主人加分办法：奖励第90000帖发帖战友和首先抓图并贴图者（以贴图时间最先者为准）：1 、抓到第90000贴抓图的可加分，时间以发贴时间/修改时间为判断标准。发贴时 ...

SDS-PAGE从胶中纯化蛋白质浸提液母液：0.5 mol/L Tris-CI pH 7.91.0 mmol/L EDTA1.5 mol/L NaCL1.0 % SDS上述各取1ml 混匀，加入6 ml 水，混匀，即为10ml 浸提液。回收蛋白方法：1. 使用厚胶，设两个样品孔，一个为蛋白marker，另一为样品。2. 电泳结束后，将Marker和少许样品带切下，进行染色和脱色。剩余样品胶置于4 ℃。3. 根据Marker和被染色的样品带，切下未被染色的胶中蛋白带。4. 称重，研碎，加入3～5倍体积的浸 ...

western使用试剂汇总个人做western已快半年，下面把个人用过的试剂总结一下，可能每个人做的蛋白不一样会有少许出入。但以下试剂应该是必备！希望对各位新做western的朋友有个帮助。主要产品可在公司订购。建议刚开始做先不要买小公司产品，尽量用大公司成套产品做稳定了，再想着从小公司买便宜试剂或粉剂自己配制，以节约费用。其实国内许多公司的成套试剂，质量还不错，比自己配要方便，节约时间。一般产品公司的网站都有 ...

针对核酸序列的新蛋白预测就是在核酸序列中寻找基因，找出基因的位置和功能位点的位置，以及标记已知的序列模式等过程。在此过程中，确认一段DNA序列是一个基因需要有多个证据的支持。一般而言，在重复片段频繁出现的区域里，基因编码区和调控区不太可能出现；如果某段DNA片段的假想产物与某个已知的蛋白质或其它基因的产物具有较高序列相似性的话，那么这个DNA片段就非常可能属于外显子片段；在一段DNA序列上出现统计上的规律性 ...

对蛋白组学方面的新手很有用。MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY REVIEWS, Mar. 2002, p. 39–63Molecular Biologist’s Guide to ProteomicsPaul R. Graves1 and Timothy A. J. Haystead1,undefinedDepartment of Pharmacology and Cancer Biology, Duke University,1 and Serenex Inc.,2 Durham, North Carolina 277 ...

后基因组时代，蛋白质研究又掀起新一轮的高潮，掌握基础的蛋白质技术，是蛋白质研究这个行当中所有人都应该做的。蛋白质技术包括太多，我在这里只想与战友们一起讨论关于蛋白质定点突变的技术。结合自己的实验研究，我翻译了一些手头的资料，拿到这里跟大家讨论，园子里高人甚多，希望我这块砖能引出更多的玉来。参考文献：PCR Approaches to DNA Mutagenesis and Recombination---An OverviewBinzha ...

蛋白纯化经验指南（）摘自中国色谱网1) 白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋问有哪些可能会出现这种原因？怎么解决？测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50～60％左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀，我用0.5％CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的 ...

把您的实验好习惯说出来！ 作者：judge0zz8 文章来源：科学网论坛 实验中的每个环节都很重要，忽略任何一个都可能导致实验的失败。良好的习惯可以提高工作效率、降低实验成本、实验中出现0失误！每个人在实验中都有自己的一些好的习惯，把您的好习惯说出来吧！让大家相互学习，让大家一起把实验做好！ 下面整合了其他论坛里的一些心血，抛砖引玉，希望大家都把自己的优点说出来： tip头吸完后马上从移液器上取下来，以免忙乱的时候又以同一tip汲取 ...

毕赤酵母表达从入门到提高本文所涉及的技术要点主要来源于相关文献、网络和书籍，此外，一些操作中的技巧及经验等来自于本人及同学、朋友的总结，仅供大家参考，同时也请下载者不要传播尤其是以商业为目的的复制、传播等等；如有转载、传播请注明来源于“螺旋网”。若本文侵犯了您的版权或有任何不妥，请Email：kaosy@163.com告知。此外，由于学识、经验有限，本文难免会存在一些错误或缺陷，敬请不吝赐教，联系方式：kaosy@163 ...

生物传感器是利用附着在传感器界面上的待测生物分子与环境化学物质，或特定分子间专一性的交互作用后产生 感应信号，作为生物分子间交互作用(biomolecular interaction analysis，BIA)的检测装置。随着微机电及光电技术迅速发展，整合了光机电并应用于生物传感器上，已经开发出不同的研究领域，如：共轭焦镭射扫描荧光显微术 (confocal laser scanning fluorescence microscopy，C ...

读硕士时曾经想发表的关于蛋白印迹法（Western blot）的使用体会，但因为缺少较多样本对比分析，所以没有投得出。但我觉得实验中经过一些挫折后得到些体会，应该与大家分享一下。否则有点可惜了。也希望由此获得加分机会。蛋白印迹法的使用体会蛋白印迹法（Western blot）是分子生物学实验中研究蛋白质的一种重要方法。可用来半定量测定标本中的目的蛋白。由于标本中目的蛋白含量有限，为提高检出率，最后一步可以用化学发光法替 ...

蛋白质组学研究进展与趋势曾 嵘 夏其昌（中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学研究分析中心 上海 200031）如果在五年前提到蛋白质组学（Proteomics），恐怕知之者甚少，而在略知一二者中，部分人还抱有怀疑态度。但是，2001年的Science杂志已把蛋白质组学列为六大研究热点之一，其“热度”仅次于干细胞研究，名列第二。蛋白质组学的受关注程度如今已令人刮目相看。1．蛋白质组学研究的研究意义和背景 ...

蛋白的复性是一个世界性的难题，没有通用的方法，甚至没有靠得住的规律，只能试。可以参考以下文章。该文出处已经忘了，如果有人知道原创作者或网上出处，请补充。包涵体表达的蛋白的复性包涵体表达的蛋白的复性包涵体：包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒。包涵体的组成与特性：一般含有50%以上的重组蛋白，其余为核糖体元件、RNA聚合酶、外膜蛋白ompC、ompF和ompA等，环状或缺口的质粒DNA，以及脂体、 ...

如题。本书全面介绍目前蛋白质技术理论及应用，全书共 3843 页，够厚的吧。目录如下。Chapter 1 Strategies of Protein Purification and CharacterizationUnit 1.1 Overview of Protein Purification and CharacterizationUnit 1.2 Strategies for Protein PurificationUnit 1.3 Protein Purification Flow ChartsU ...

双向电泳实验前一天将所需的烧杯,试瓶,玻棒,量筒等泡酸.并向准备间要求大量的双蒸水.第一天,准备试剂.1.水化液Reagent Quantityurea12gChaps0.5gBromphendblue50μl 1%solution加双蒸水定容至25ml,1ml分装贮存于-20℃1)加双蒸水搅拌均匀,要求没有气泡和颗粒,否则会影响实验结果.尿素可以在27℃水浴中溶解,温度不可过高.2)DTT和IPGbuffer临用前加:1ml ...

～～～蛋白质技术讨论版170000帖庆典活动～～～蛋白质技术讨论版作为实验技术讨论区一个重要的板块，长久以来得到众多热心的战友厚爱和支持。为了答谢战友们的关心和维护，现举办十七万帖有奖抓图活动，希望广大战友在这个充满激情的夏天变得更加富有活力。我们有信心把蛋白版办成丁香园的精品版块，我们将向更高的目标迈进！我们期待每一位战友的参与！在这里感谢大家长久以来的热心和关爱，你们才是蛋白版的支柱和主人～～～第十七万帖抓图 ...

以下是关于蛋白质测序的论坛帖子,希望有所帮助:蛋白质测序公司http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1424257&sty=3&keywords=%B5%B0%B0%D7%D6%CA+%B2%E2%D0%F2蛋白质测序联系http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/50023_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65 ...

现在大家都是做SDS-PAGE或者双向电泳比较多，而做非变性电泳的似乎少一些。而我本人接触非变形电泳较多，一直认为它还是很有特点的，能够有很多独特应用之处的，所以在此结合我本人经历向大家介绍一下非变性电泳。非变性电泳，蛋白质在电泳过程中是处于非变性的，电泳时蛋白的迁移率取决于蛋白的电荷和分子量，非变性电泳在完成电泳后，可以进行蛋白质活性测定（如果是酶的话，可以进行酶活检测）或者检测同功酶，或含亚基的完整蛋白的分 ...