蛋白质技术

Preparation of protein extracts for western blot 1.Grow cells to mid-log (OD600 less or equal to 1.0). 2.Harvest about 5 OD's of cells in a 13X100 glass dispo tube (Use new tubes.Can be up to about 6 ...

一、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 （二）试剂准备 1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中 抽滤除菌。 2、 L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g碳酸氢钠， ...

Hahn Lab 1.In microfuge tubesspin down 0.1 ml of uninduced cells grown to near saturation or 0.15 ml of IPTG induced cells.Remove YT (or LB)media with a pipetman or drawn out pasteur pipette and freez ...

Gel Mobility Shift Assay Conditions -Mg/EDTA in Gel and Buffer Steve Hahn Protein Dilution Buffer 5ml 20 mM Tris pH7.9 100 microliters 1M Tris 7.9 150 mM KCl 0.75 ml 1 M KCl 1 mM DTT 50 microliter ...

Lowry Protein Assay Laboratory of P.J.HansenDept.of Animal SciencesUniversity of Florida http://www.animal.ufl.edu/hansen/Protocols/LOWRY.htm The Lowry procedure is one of the most venerable and wide ...

1 分离方法 　　采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。 1.1 高效液相色谱（HPLC） HPLC的出现 ...

Buffer A Buffer B ...

Purification of GST fusion proteins in E.coli GST融合蛋白纯化--纯化小量蛋白 Sugden labMcArdle Laboratory for Cancer ResearchUniversity of Wisconsin-Madison Medical School Small scale fusion protein preparation Gr ...

一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2 CH2 COOH+3H2 SO4 ――2CO2 +3SO2 +4H2O+NH3 (1) 2NH3 +H2 SO4 ――(NH4 )2 SO4 (2) ...

Place the tissues on labeled aluminum foil and immediately place in dry ice.It is imperative that the tissues stay cold so that protease do not have time to act on the protein. Place the tissues in a ...

Cell Lysis/Western/IP Steven FinkbeinerDepartments of Neurology and PhysiologyUCSF http://gweb1.ucsf.edu/labs/finkbeiner/Protocol/protocol_list/Cell_Lysis.shtml compiled by 6/95 by AJS from AB)Fresh 1 ...

利用一种创新分析策略，Scripps研究所的研究人员深入分析了在恶性人类肿瘤细胞中异常高度表达的一种酶。当这种叫做KIAA1366的酶被失活时，能抑制宫颈癌和乳腺癌细胞中肿瘤的生长和迁移。这意味着这种酶的抑制剂可能成为治疗多种癌症的“良药”。 通过联合酶活性和代谢物分析，研究人员确定出这种之前未知功能的蛋白质是一种促进癌症生长的脂质信号途径的一个关键调节因子。KIAA136 ...

J. Movius K Coachman and S. Hahn (Hahn Lab) Induction of BRF in bacteria and purification on Ni-NTA agarose Transform BRF plasmid into strain BL21 DE3 (pLysS) or JM25 (DE3 containing the Arg t ...

This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives.Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obje ...

HIS-tagged protein purification John Mundy Institute of Molecular Biology Copenhagen Denmark http://www.arabidopsis.org/info/Protocols_Mundy2.jsp#his 1 liter cell prep 1) grow 20ml ...

表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然，它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性过高等缺点。 原核表达从一开始的设计就非常重要，所谓好的开始是成功的一半 ...

1.Grow 25mls yeast cells to 5x10E6. 2.Sequentially spin down cells in a 15 ml polypro tube. 3.Wash cells with 1ml ice cold ddH2Otransferrring to an eppy tube. 4.Recon.cells in 1 ml ice cold ddH2O cont ...

Sample Buffer: 10 ml 0.06M Tris-HCl pH 6.8 0.6 ml 1M Tris 6.8 ...

表达分析、分子生物学研究以及新的分析软件工具将会推进生物系统水平的研究。 文/EricChan西雅图RosettaBiosoftware数据分析师译/李亚萍 在基因表达研究中，广泛的基因分析可以对生理状态或者是一个细胞表型有关的基因进行系统监测。可以利用高通量分析在数据输出和获取数据快捷两方面的优势，对药物发现过程中的药靶候选基因进行鉴定，在假设驱动的研究中，该技术也提供了必须的系统背景知识。一旦 ...

之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的pET系列载体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darmstadt，已有300多年的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。 ...