蛋白质技术

1. While your SDS-PAGE gel is running make your transfer buffer and chill to 4°C. Check that you have a frozen buffer dam is ready (stored in freezer next to Shikha top shelf to the right s ...

1. Run an SDS gel as usual. (It's nice to run a lane of prestained markers which will transfer on to the blot and control for the transfer).2. Transfer: make 4 liters of transfer buffer. Cut 3 pieces ...

推荐书籍：《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》 1）我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50~60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但 ...

选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的 ...

Bacterial Protein Extraction (mini-scale)Using B-Per B-Per (PierceCat number: 78248)Extraction of 1.5ml bact.culture OD600nm 1.5-3.5 A useful procedure for initial screening of expression conditions i ...

Hattoti's protocol adapted to cell culture: Hattori MTugores AVeloz LKarin MBrenner D (1990)A simplified method for the preparation of transcrip-tionally active liver nuclear extracts.DNA Cell Biol.Vo ...

Yeast Nuclear Extract (Small Scale) Hahn Lab (adapted from J.LeatherwoodPtashne lab) last modified MonAug 272001 Cell Growth 3 liters of cells are grown in YPD (3% glucose)to A600 of 3-5.Antifoam A (t ...

These protocols should yield enough cytosol and organelles for 1-200 MT/Organelle motility assays. Solutions and Reagents • Freshly removed or flash frozen rat liver • PBS •Homogeniz ...

Preparation of cell lysates from E.coli by enzymatic lysis Materials Chemicals lysosyme Lysis buffer 50 mM Tris-HCl pH 7.5 50-200 mM NaCundefined 5% glycerol (v/v) 1 mM DTT 1 mM PMSF~undefinedThe NaCl concentration ...

1.Wash adherent cells twice in the dish or flask with ice-cold PBS and drain off PBS.Wash non-adherent cells in PBS and centrifuge at 800 to 1000 rpm in a table-top centrifuge for 5 minutes to pellet ...

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活 ...

一、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 （二）试剂准备 1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中抽滤除菌。 2、L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g碳酸氢钠，10ml 1 ...

一、原理 细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。 二、试剂准备 1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29. ...

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的 ...

IASYS-binding cuvette and getting KD Immobilization of ligands on cuvette surfaces and measure the interactions of ligand which is immobilized on the cuvette and the ligate which is added to the immob ...

一、实验目的 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待 ...

1.DEAE-Sephadex A-25离子交换层析法 ⑴ 用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液平衡DEAE-Sephadex A-25柱。 ⑵ 加样后，用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱12h~14h。 ⑶ 改用0.4mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱，流速0.15ml~0.2ml/min，收集流出液，测OD275nm。 ⑷ 测SP ...

一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、 实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质 ...

一. 实验目的 1. 掌握重组蛋白诱导表达的方法; 2. 亲和层析法纯化His 标记的融合蛋白 二. 实验原理 将目的基因连接在表达载体后通过加入诱导剂IPTG诱导目的基因表达。表达载体除具有蛋白表达所需要的启动子外在终止子前有6个His编码序列便于蛋白的亲和层析纯化。 亲和层析以蛋白质或生物大分子和结合在介质上的配基间的特异亲和力为基础。本实验采用 ...

(一) 原理 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变蛋白质表面电荷大量被中和更加导致蛋白溶解度降低使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 (二) 主要材料 ...