蛋白质技术

金鱼公主 谢谢回复Fasta921 细胞中蛋白跨膜运输一般是：在蛋白质合成之后才进行的，跨膜前须从折叠状态转变为解折叠状态。生理状态下这个过程涉及到伴侣分子协助及信号肽指引，如果人工操作，对于完整蛋白的解折叠状态相对比较难把握！可能合成跨膜a螺旋先与膜脂双分子层结合后再与两侧蛋白连接更可控些。PS：建议查阅相关文献，纸上谈兵有时行不通的。金鱼公主 Fasta921 wrote:细胞中蛋白跨膜运输一般是：在蛋白质合成之后才进行 ...

shiliushi 请教各位，用于细胞学实验的多肽的纯度要求至少多少呢？98%以上还是95%以上？freecell 个人认为： 越纯越好，最少95%。dianaofyezi 最好是能够达到98%。如果某些多肽合成困难，至少也是需要95%shiliushi 十分感谢！威斯腾 如果是制备抗体95%以上甚至是99%比较好，需要资料留下邮箱我发个大家本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

nemo2004 想做一段多肽用来免疫 不过太小 不好表达也不好纯化 想把它与一个大的蛋白放在一起共同表达使他们连起来 纯化这个大的蛋白 不过不能让这个蛋白的四级结构把多肽包裹起来。。。 求助技术。。。freecell 可以试试用HBV的核心抗原藕联。orphean 免疫：多肽可联KLH或BSA纯化抗体：多肽直接连填料就行了。你所谓的纯化是指这个嘛？xuezhishui 建议构建多肽的串联体，这样免疫原性强，而且省去了大蛋白质的影响，否则纯化的产物中 ...

tsfkyh 做的目的蛋白，用药物处理后蛋白水平明显增高，想在转录水平研究一下，药物处理后，相应的核转录因子受体与目的基因启动子序列上元件结合。做了报告基因载体想检测目的基因启动子活性，但做了几次基本没有变化，我想知道这是由于哪种原因造成的? 使用的EL4细胞做的转染，文献报道过的，都是使用这种细胞研究白介素5的启动子活性的。我使用的启动子片段大小为-1275~+45，目前我怀疑可能我所用的启动子片段中可能含有某种抑制 ...

attenuator 有一个问题一直没有查出相关资料或信息。就是：β globin 蛋白在血液组织之外的细胞有没有表达，能不能RT检测出transcripts或western检测出protein。为了这个去重复实验，条件不允许，但前人肯定有做过的，教科书里没有介绍，只介绍了时间特异性（胚胎到成体），没有介绍组织特异性——除了造血组织（或成红祖细胞）之外，在其他组织里，β globin是不是就沉默了，它那一簇基因是不是从它LCR开始 ...

小老鼠tina Toll样受体的抗体是如何确定的？我查了好多文献都没有看到。只知道它的基因序列，如何证明这个蛋白是存在的呢？像在人体上MyD88等都可以借助来进行受体的分析。但这些在一些动物中还没有证实存在，下一步的工作不知该如何进行，希望通过大家的讨论给我一些新的思路。谢谢:)Fasta921 是Toll样受体的基因片段还是Toll样受体的抗体基因片段？想证明Toll样受体蛋白存在还是想证明Toll样受体的抗体蛋 ...

pophjp 请问各位大侠可以用什么方法检测IRP和IRE的结合力情况，就是铁调节蛋白和铁反应元件之间的结合力变化，什么地方可以做呢？先谢谢了~-~freecell google: binding capacity of irp with ireluoqq1985 gel-shift试验可以检测luoqq1985 很多文献都有做IRP与IRE结合试验的，你可以下一些IRP有关的文献，基本都有做本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯 ...

shenqi0622 最近在看蛋白质组学的文章，很多英文文章里提到了Reference compendia approach，我不知道Reference compendia 是什么意思，有哪位大侠知道啊，急！！！！！！freecell 只有参考上下文了。Fasta921 This study creates a compendium of gene expression in normal human tissues suitable as a reference for defining basic org ...

小扇扑流萤 最近在做泛素化，已经得到了一个蛋白证明它发生了泛素化。下面想分析一下这个蛋白的氨基酸中在哪个位点发生了泛素化。请问有没有专门预测泛素化位点的工具？我看到ExPasy中有SUMO化的预测工具，这两者有没有共同点呢？小扇扑流萤 没有人做这个吗？SOS!!wuyuhere I am studying in SUMOylation and Ubiquitylation.They all recognize Lysine residue.wuyuhere my m ...

yan0495 R&D公司的recombinant human EGF Receptor来源于DNA编码的人类EGFR的胞外区，而酪氨酸激酶活性区在胞内，我现在需要做酪氨酸激酶抑制剂的筛选，不知道能不能用这个蛋白？筛选原理：以多聚酪氨酸多肽为底物，用EGFR催化酪氨酸的磷酸化，用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸磷酸化程度，以OPD做为辣根过氧化物酶底物显色，从而筛选EGFR抑制剂。附上EGFR说明书和图。请各位指点啊！yan04 ...

yunchenxia 我正在写硕士毕业论文，做了很多关于western检测蛋白质表达的实验，我想问一下这些试验结果是直接将图片贴到论文上还是要用软件对电泳条带进行光密度(OD)分析，然后进行统计，我看到国外的文献直接是贴图片的，国内有一些进行了统计，所以想问一下要不要统计？ 最好解释一下，谢谢。licanming 请问你如果不做统计的话怎么知道组间是有差异的？而且这些差异是否具有统计学意义？而我看的外文文献基本都有做OD， ...

yjr923 哪位师兄姐做过35S掺入法检测细胞蛋白质翻译率，请教若干问题。谢谢freecell 请教什么问题？fishbody 我的问题是，买S35-met，手续繁琐，要经过环保厅，看来能买来要过些时日了。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

Eudreamality http://www.curehunter.com/public/keywordSummaryC091648-human-TUFM-protein.do这个里面说TUFM别名也叫做placental isoferritin associated p43, 在NCBI的MESH里面好像也是。但文献看起来是两个完全不同的蛋白啊？在pubmed上查文章，输入TUFM，就会自动链接到什么placental isofer ...

trick 现在大部分的文章做到PKC的活化都是通过western检测磷酸化，这个我也做过，但是不太明显，所以想从pkc转位这个角度做它的活化研究。。但是看了一些文献和综述，conventional pkc和novel pkc这样检测他们的活化都是没有问题的，但是有的综述上说atypical pkc的活化是不发生转位的，因为它相对与前2者缺乏一个佛波酯激活域，但是我也看到一些文献做atypical pkc的活化也是通过做他的 ...

残夜寒馨 各位战友有做FKHRL1的没有阿？请教下做Western 用哪个磷酸化位点好一些呢？Ser 还是Thr好一点呢？谁有什么建议没有。。多谢了！！cstchina 能不能告诉我您做哪方面疾病或模型的研究，或许我可以给您一些推荐！即便您要检测SER也要几个不同的位点需要鉴别。cstchina 能不能告诉我您做哪方面疾病或模型的研究，或许我可以给您一些推荐！即便您要检测SER也要几个不同的位点需要鉴别。残夜寒馨 检测应激后海马的这 ...

文竹竹 我最近做western blotting很郁闷。上周用压片盒压片曝光结果还可以，条带很清楚，可是昨天在同样条件下做的结果，什么条带都没有，是白板。为什么？请高手给予帮助！谢谢！二抗？ECL液？liruonan728 二抗出问题？1、二抗本身失活2、二抗被灭活想一想操作过程有无上述失误liruonan728 二抗出问题？1、二抗本身失活2、二抗被灭活想一想操作过程有无上述失误zhongqiuxie 原因太多。一抗问题可能性更大。 ...

jingjingyufu 我想通过western来观测cullin4a蛋白质在小鼠胚胎成纤维细胞中的表达情况，可是做了很多次的western，条带不出的时候居多，即使出了，条带的大小与目的条带的大小也不一样，要比目标带小20KD左右，cullin4a主要功能是参与蛋白质的泛素降解，会不会是因为蛋白质降解了所以条带变小或是此带是非特异性的条带，想请教一下对cullin4a蛋白了解的高手指点一下，不胜感激！lala ...

bst5 用pCDNA3.1-HIS载体做的重组，切去了一段含有终止密码子的片段，但下游仍有一个终止密码子，想请教一下是否影响目的蛋白的表达吗？sunyong_97 如果还有一个终止密码子，那么到那个位置肯定要终止的啊bst5 可是终止密码子在我目的蛋白的下游啊，谢谢你的回复sunyong_97 bst5 wrote:可是终止密码子在我目的蛋白的下游啊，谢谢你的回复这样的话，你的目的蛋白表达出来以后再终止。本文由丁香园论坛提供，想 ...

heroflower 我现在有一个启动子区的序列，已经分析了可能结合的转录因子，现在想看看这个转录因子中哪些是一个激酶的下游底物。也就是说这个激酶可以调节哪些转录因子，有什么办法嘛？谢谢heroflower 没人知道嘛？doge 这个网站应该可以满足你的要求http://www.ebi.ac.uk/thornton-srv/databases/cgi-bin/CSA/CSA_Site_Wrapper.pldoge sorry ，上面的帖子 ...

chenglanying 哪位高手能告诉我质谱的研究进展？急急急！dnazyme 问题不具体。如果是仪器问题，去仪器论坛www.instrument.com/bbs.如果是方法建立，去分析版；如果是学术问题，去检索资料。 www3.interscience.wiley.com/journal/49879/homectttongji 楼上说的很对！要具体问题才能具体分析哇~~~shylook chenglanying wrote:哪位高手能告诉 ...