蛋白质技术

相关专题 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)是蛋白分析中最经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS)以及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原，肽链被打开。打开的肽链靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的大小的肽链由于在迁移 ...

相关专题 醋酸纤维膜电泳是一项简便而又迅速的方法。它的优点是：①电泳区带分离清楚，比琼脂平板电泳分辨率高;②可以定量;③样品用量少，只需要几微升即可。 (一)材料与试剂 1.pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液 2.0.5%氨基黑染色液 3.透明液：冰醋酸 3 份 ;95%乙醇 2 份 混合即可 4.醋酸纤维膜 (二)操作方法 1.将醋酸 ...

相关专题 原理：转移电泳是将经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出的蛋白质谱直接转移到硝酸纤维膜上，而形成固定相，并同时排除各种干扰物质，保持其天然构象和生物学活性，完成在凝胶中难以进行的各种生物试验。 材料 1.琼脂糖 2.丙烯酰胺 3.甲叉双丙烯酰胺 4.十二烷基磺酸钠(SDS) 5.硝酸纤维膜滤纸 孔径0.45μm 6.琼脂糖凝胶电泳缓冲液 ...

相关专题 一、实验目的与原理 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)，大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有 ...

相关专题 水平条纹的出现可能是第一向分离时(通常在IPG胶条上开展)出现问题。这篇文章着重讨论了垂直条纹，它是由第二向分离的相关问题引起的。垂直条纹不应与双向图中的垂直缺口或空白区域相混淆。 蛋白溶解度差 在第一向分离之后，所有蛋白移至它们的等电点，不携带净电荷。介质的离子强度也非常低，因为小的离子已经全部迁移出第一向胶条。在这些条件下，蛋 ...

相关专题 一、第一向等电聚焦 1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT，不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管)，置室温溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。 3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。 4. 从冰箱 ...

相关专题 1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子 ...

相关专题 试剂： 1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8)5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在-20℃保存数月。 2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定 ...

相关专题 (一)第一向等电聚焦 1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT，不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管)，置室温溶解。 2.在小管中加入0.01g DTT，Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。 3.从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。 4.从冰箱中取-2 ...

相关专题 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS-PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论： Q：SDS-PAGE电泳的基本原理? A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠)，SD ...

相关专题 (一)原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不相同。在实验中，电泳凝胶分为 ...

相关专题 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的?预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗?电泳1-2小时再加结合反应产物吗? 预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂，提高分辨率，不加任何物质，一般30-60分钟后加样电泳。 2. 银染的步骤是什么?银染的关键因素是什么? 步骤是： (1) 固定：10%冰乙酸30min。 ...

相关专题 凝胶干燥时遇到的主要问题是凝胶的变形和破裂。将凝胶放在Whatman 3MM滤纸上可防止干燥凝胶变形，但凝胶是否破裂取决于凝胶的厚度和干燥器的质量，因此，应尽量使用薄胶并使凝胶干燥器处于良好状态，使其真空压力波动极少。 (1)试剂与配制：固定液：冰醋酸:甲醇:水(10:20:70) (2)电泳后的凝胶用5～10倍体积固定液在室温下 ...

相关专题 SDS-PAGE电泳可用于分离蛋白质和核苷酸，这里综述了SDS-PAGE实验原理、试剂和器材、以及实验操作步骤。 一. 实验原理： SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使 ...

相关专题 本实验的主要目的是掌握RNA琼脂糖凝胶电泳的操作技术，总结了RNARNA琼脂糖凝胶电泳的原理、实验材料、试剂及器具、操作步骤及注意事项。 一、实验目的 学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。 二、实验原理 RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变 ...

相关专题 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳主要涉及两个过程：一、血清脂蛋白的预染;二、预染的血清脂蛋白电泳分离。本文总结了血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳、试剂与器材以及操作步骤。 原理： 将血清脂蛋白用脂类染料(如苏丹黑或油红O等)进行预染.再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离.通电后脂蛋白向正极移动并分离为几个区带. 试剂与器材： 1、巴比缓 ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白和寡核苷酸的分离，最常用于蛋白质的分离，这里总结了DNA电泳专用的各种浓度PAGE胶配制的配方及制备方法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质。聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺（CH2=CHCONH2 ...

相关专题 Western Blot技术专题 western blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。 虽然，顺利的时候western blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出 ...

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相关专题 电泳原理 阳极电泳用水溶性树脂是一种高酸值的羧酸盐，在水中溶解后以分子和离子平衡状态存在于直流电场中，通电后，由于两极的电位差，离子定向移动，阴离子沉积在阳极表面，而阳离子在阴极表面获得电子还原成胺，它是一个电化学反应，包括电泳、电解、电沉积和电渗四个同时进行的过程。 1.电泳：在直流电压作用下，分散在介质中的带电胶体 ...