蛋白质技术

相关专题 二维电泳即双向电泳，是蛋白质分析常用的技术手段。第一向等电聚焦电泳：根据蛋白的等电点分离蛋白质;第二向SDS-PAGE电泳：根据蛋白分子量的大小分离蛋白质。本文总结了二维电泳中常见的14个问题及其解答。 1. 重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽，直接跑 2D 的一向吗? 一般情况下是可以的。但当上样量特别大时，可能会有一部分蛋 ...

相关专题 尽管有了教科书、仪器说明书、产品操作指南和网络教程，但周围仍存在着多种错误的操作步骤，使电泳运行反复出现问题，并导致不适当的结果。迷你系统的相对低分辨率以及短运行时间常常掩盖了这些问题。然而，在大型凝胶的高分辨率双向电泳中，这也是蛋白质组学中最重要的分离方法之一，这些错误的后果会变得更为明显。来自GE Healthcare Lif ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇 改进一：配胶 背景：在配制SDS-PAGE胶的时候，加入分离胶的过程中常常会带入气泡，即使用双蒸水来压平界面也有可能因为力度不匀而导致胶面不够齐平，最后使跑出来的相同大小的蛋白条带不在同一个水平面上。 方法改进：所做的改进很简单却很有效，加完分离胶后，用移液枪吸取酒精(浓度没有特别要求，干 ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇 SDS-PAGE因易于操作，而具有广泛的用途，是许多研究领域的重要的分析技术。 1. 蛋白质纯度分析； 2. 蛋白质分析量的测定，根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量； 3. 蛋白质浓度的测定； 4. 蛋白质水解的分析； 5. 免疫沉淀蛋白的鉴定； 6. 免疫印迹的第一步； 7. 蛋白质修 ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇 1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很 ...

相关专题 电泳仪的使用方法和产品推荐电泳设备专题 1.电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。 2.仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。 ...

相关专题 电泳仪的使用方法和产品推荐电泳设备专题 1937年，瑞典生化学家Tiselius集前人百余年探索电泳现象之大成，发明了Tiselius电泳仪，在此基础上建立了研究蛋白质的自由界面电泳方法，利用该法首次证明人血清是由白蛋白(A)、α、β、γ球蛋白组成，并因此于1948年获得阿果奖。随后电泳技术的发展突 ...

相关专题 电泳仪的使用方法和产品推荐电泳设备专题 1.首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。 2.电泳仪电源开关调至关的位置，电压旋钮转到最小，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。 3.接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止，设定电泳终止时间，此时电泳即开始进行。 4.工作完毕后，应将各旋 ...

相关专题 电泳仪的使用方法和产品推荐电泳设备专题 Bio-Rad 提供完整系列的电泳仪以满足电泳技术最严格的要求。这些电泳仪轻便、编程简单，并经最严格的国际安全标准IEC1010-1 认证，以确保人员与环境的最高安全保证 。通过以下选购指南选择最适合你电泳需要的电泳仪。 更多信息，请访问： www.bio-rad.com/powersuppl ...

相关专题 电泳仪的使用方法和产品推荐电泳设备专题 EPS 100 电泳仪应用微电脑和开关电源技术，比传统的电泳仪有着不可比拟的优点，可选择定时与计时输出，EPS 100 电泳仪具有输出电压稳定，输出短路保护，未接负载停止输出电压功能。EPS 100 电泳仪适合于做核酸电泳实验。 仪器功能 EPS 100 具有以下功能: 4组输出(可同时连接四 ...

相关专题 电泳仪的使用方法和产品推荐电泳设备专题 特点: 进口的性能，国产的价格 ●采用微电脑智能控制 ●液晶屏显示同时显示电压、电流、定时时间 ●具有记忆功能 ●在工作运行中，可实时调整恒压或恒流 ●自动空载无输出保护 ●自动过压保护 过流保护 ●自动过载短路保护 ●输出定时计时功能 技术指标： 1. 输出电压：10～600V DC 2. ...

相关专题 Mini Protean 3 Cell小型垂直电泳简介： 凝胶数:1 或2玻板尺寸(W x L)短板10.1 x 7.3 cm间隔板10.1 x 8.2 cm凝胶大小(W x L) 手灌胶：8.3 x 7.3 cm; 预制胶： 8.6 x 6.8 cm典型上层缓冲液体积120 ml典型下层缓冲液体积180 ml典型SDS-PAG ...

相关专题 电泳仪的使用方法和产品推荐电泳设备专题 多特点： 技术先进，电路开发软件编写，完全拥有自主知识产权，保证产品的合法性。 品种齐全，选择余地大，满足你的基本需要和特殊诉求。 适用范围广，广泛应用于蛋白质电泳及转移，核酸电泳等应用领域。 改变传统的输入输出方式，采用开关电源 性能稳定可靠，使用寿命长。 电脑控制整个输出和反馈过程，精度高 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液，PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，PH6.8;电泳缓冲液，PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板，电泳电源架，电泳槽，电泳仪等;蛋白Mark。 二、方法与 ...

相关专题 1. 总的策略 ① 化学试剂纯度要高，至少是分析级，目前国产试剂达不到纯度要求 ② 使用去离子水(电导p;过滤所有的溶液，使用干净无灰尘的容器 2. 样品制备 ① 样品提取缓冲液(裂解缓冲液)必须新鲜配制。或者分装成 1ml，于-78℃冷冻保存， 裂解缓冲液一旦溶解不能再冷冻 ② 如有必要，在细胞裂解时加入蛋白酶抑制剂。注意：几种 ...

相关专题 A. 裂解液 (lysis solution) (8M Urea 4%CHAPS 2% Pharmalyte3-10 40 ml) Final concentrationAmountUrea(Fw 60.06)8M19.2gCHAPS4%(w/v)1.6gPharmalyte3-102%800μlDouble distill ...

相关专题 1. 用 PDQuest软件或肉眼比对，找出感兴趣的蛋白点，并做好标记和记录。 2. 用 MilliQ水冲洗胶 2 次。 3. 用色谱纯甲醇和 MilliQ水冲洗 Ep 管 4. 将枪头(200μl)下端剪去，使其内径略小于蛋白斑点的直径，用色谱纯甲醇和MilliQ水冲洗枪头。 5. 对准斑点中央小心将蛋白切割下来，放入Ep ...

相关专题 水化上样( 被动上样) 1. 从冰箱中取出 IPG 胶条，室温放置 10min。 2. 沿水化盘槽的边缘从左向右线性加入样品，槽两端各 1cm 左右不加样，中间的样品液一定要连贯。注意：不要产生气泡，否则会影响胶条中蛋白质的分布。 3. 用镊子轻轻撕去 IPG 胶条上的保护层。注意：碱性端较脆弱，应小心操作。 4. 将IPG胶条胶 ...

相关专题 样品制备原则 样品制备是双向电泳中最关键的一步，将直接影响 2-DE 结果好坏。目前并 没有一个通用的样品制备方法，尽管处理方法多种多样，但都遵循几个基本的原则：1. 尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的 损失;2. 减少对蛋白质的人为修饰;3. 破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作 用，并使蛋白质处于完全 ...

相关专题 一、培养细胞(culture Cell)样品处理方法： 培养动物组织细胞由于没有细胞壁，因此可以将细胞收集下来，直接加入裂解缓冲液(Lysis buffer)抽提总蛋白。裂解缓冲液有多种配方，本实验室主要采用如下成份： 1. 7M Urea，2M Thiourea，4%(w/v)CHAPS，40mM Tris-Base，40mM ...