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Southern blot实验安排总结

相关专题 Southern blot是分子杂交常用的技术,对于小编来说这可是浩大的工程,合理有序的实验安排是非常有必要滴。否则,一不小心,几天的心血的以下是搜集的有关Southern blot 实验安排,供参考。 Southern blot 实验安排酶切及转膜:第一天晚上:酶切过夜第二天:跑电泳,看酶切效果。50V,6小时。转移过夜。同时准备 ...

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Northern blotting实验方案

相关专题 本文主要介绍了Northern印迹杂交(Northern blotting)实验的原理、器材和具体方法步骤。Northern blotting是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。 Northern blotting 1.原理 Northern印迹杂交(Northern blotting)将RNA从琼脂糖凝 ...

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详细版:western-blotting实验方案

相关专题 本文详细介绍western-blotting的实验方法步骤,主要包括了配胶、样品处理、电泳、转膜、封闭及杂交、发光鉴定、增强敏感性、NC膜的多次使用等7个方面的内容。 western-blotting 一、配胶 注意一定要将玻璃板洗净,最后用ddH2O冲洗,将与胶接触的一面乡下倾斜置于干净的纸巾晾干。 分离胶及浓缩胶均可事先 ...

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哺乳动物DNA:Southern印迹杂交技术实验

相关专题 本文主要介绍了利用Southern印迹杂交技术来获得DNA分子中基因编码区的大小和位置的实验原理、方法步骤。主要分成待测核酸样品的制备和 琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品两部分。 Southern印迹杂交仪器 实验原理 核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的 ...

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核酸分子杂交的基本概念和实验原理

相关专题 本文介绍了分子杂交的基本概念及原理,其中主要是从DNA的变性和复性两方面来讲解分子杂交实验的原理。 核酸分子杂交 主要内容: 一、分子杂交的概念 二、分子杂交基本原理 (一)DNA变性: 1、DNA变性的方法 2、增色效应 3、溶解曲线 4、融解温度 5、影响Tm值的因素。 (二)复性:退火 一、分子杂交的概念: 分子杂交 ...

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几种核酸杂交技术的比较 点杂交实验原理、步骤

相关专题 本文主要简单阐述了Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、点杂交这几种核酸杂交方法的异同点。并介绍了点杂交的基本概念及实验原理、方法。 几种核酸杂交技术的比较 点杂交实验原理、步骤 (1)几种核酸杂交的异同点 核酸杂交是分子生物学的基本技术,也是遗传学研究和基因诊断的常用方法。核酸杂交的形式有多种,其中最常 ...

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华人学者:取代双向电泳的新技术

相关专题 麻省理工学院(MIT)新型分子筛(molecular sieve)能够加速对蛋白的精确分类,有望协助疾病的检测和治疗。 分析复杂生物溶液,如血液中的蛋白对于研究患病机理和发展新型治疗手段越发重要。MIT机械工程部研究生傅建平(Jianping Fu,音译)率领的研究小组,设计出一种埋在硅芯片中的筛网,能够对包含蛋白的生物样本进行分 ...

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提速DNA电泳速度

相关专题 来自宾夕法尼亚州费城杰佛逊医学院(Jefferson Medical College)外科系,以及Kimmel肿瘤中心(Kimmel Cancer Center)的研究人员申请到了一项新专利,这项专利也许未来某天会成为DNA分析过程中的关键技术,而且这一发现也可以应用于多个领域,比如法医鉴定,克隆或者生物恐怖(bioterrori ...

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定量蛋白质组学荧光差异凝胶电泳技术

相关专题 要开展蛋白质组学研究,双向电泳是你必须了解掌握的最基础的蛋白质分离技术,正如普通凝胶电泳对于核酸纯化。可是一提起双向电泳,多数人还是会直皱眉头----别摇头摆手又叹气啦,今天的双向电泳早已深入改进了,特别是其中最热门的荧光差异凝胶电泳技术(DIGE),因为消除了传统双向电泳的一些弊端,已经使得好多实验室对双向电泳重拾信心,并逐渐得 ...

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通用电气为双向电泳提供新的协同解决方案

相关专题 蛋白质组学的研究终究离不开双向电泳,无论你喜欢与否。但双向电泳中的不确定性却一直困扰着研究人员,让人颇为烦恼。通用电气医疗集团的生命科学部拥有着市场上最多的双向电泳用户,无疑也就有了最丰富的疑难排解经验。据介绍,其实绝大部分问题源自于实验结果中不可控的系统误差。怎么办?可不能让这些系统误差扼杀了我们的研究成果。 为了解决这些问题, ...

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Bio-Rad推出新一代高通量等电聚焦系统

相关专题 全球电泳系统巨头Bio-Rad公司近日推出一款高通量的等电聚焦系统PROTEAN i12 IEF系统,能在12个独立的通道同时对12个IPG胶条进行等电聚焦。 市场上大部分的IEF系统都有多个通道,但各个通道的条件都是相同的,因此每次只能摸索一个条件。传统的IEF槽将总电流平均分到所有通道。除非所有的样品有着相同的电导率,否则电流 ...

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凝胶迁移或电泳迁移率实验技术进展

相关专题 凝胶迁移或电泳迁移率实验原理 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 具体实 ...

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双向电泳技术

相关专题 蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心.双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个E.coli蛋白并表明蛋白质谱不是稳定的而是随环境而变化.双向电泳原理简明第一向进行等电聚焦蛋白质沿pH梯度分离至各自的等电点;随后再沿垂直的方向进行分子量的分离.目前随着技术的飞速发展已能分离出10 000个斑 ...

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非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

相关专题 Native-PAGE原理: 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下 对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于同工酶的鉴定和提纯.未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用因而可 ...

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高效毛细管电泳(HPLC)的基本原理

相关专题 高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)是近年来发展起来的一种分离、分析技术,它是凝胶电泳技术的发展,是高效液相色谱分析的补充。该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等,HPLC分析 ...

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Native-PAGE常见问题

相关专题 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的?预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗?电泳1-2小时再加结合反应产物吗? 预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂提高分辨率不加任何物质一般30-60分钟后加样电泳. 2. 银染的步骤是什么?银染的关键因素是什么? 步骤是: (1) 固定:10%冰乙酸30min. (2) ...

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一些双向电泳的分类

相关专题 非变性2D-PAGE:两向均在非变性条件下进行这样分离的蛋白质点的等电点和表观分子量同生理条件下获得的这些蛋白的值是一样的; 非变性/SDS-2D-PAGE:第一向采用非变性IEF之后在2%SDS溶液中平衡;第二向也在SDS存在的条件下进行.适于分析非共价键连接的蛋白-蛋白间的相互作用. 非变性/还原/SDS-2D-PAGE:非变 ...

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NuPAGE® 凝胶试剂帮你解开电泳误区

相关专题 误区:凝胶试剂总是修饰我的蛋白 事实:NuPAGE® 凝胶试剂实际上保护了您的蛋白 更中性pH是关键 tris-甘氨酸凝胶系统的根本缺点是样品制备过程中的蛋白降解。在使用pH 6.8的tris-甘氨酸样品缓冲液时,样品在缓冲液中加热,因tris-甘氨酸的负温度系数导致pH值下降。这最终导致蛋白水解。 NuPAGE® 凝胶试剂通过维 ...

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电泳的基本原理和分类

相关专题 在电场中,推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积。F=QE质点的前移同样要受到阻力(F)的影响,对于一个球形质点,服从Stoke定律,即:F′=6πrην式中r为质点半径,η为介质粘度,ν为质点移动速度,当质点在电场中作稳定运动时:F=F&prime ...

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双向电泳常见问题

相关专题 1. 重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽,直接跑 2D 的一向吗? 一般情况下是可以的。但当上样量特别大时,可能会有一部分蛋白质没有被胶条吸收,这样跑完 1D 和 2D ...

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