蛋白质技术

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相关专题 蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了下几个蛋白纯化实验中的遇见的问题及其解决方式。 1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲 ...

相关专题 分子量测定的实验方法与强兵利器 一、实验目的和内容 目的：1. 通过本次实验的学习与操作，使学生在实验过程更好的理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)测定蛋白质纯度与分子量的原理与依据; 2. 要求学生掌握电泳原理以及SDS-PAGE垂直板电泳分离蛋白质技术; 3. 熟悉垂直板电泳操作原理和方法，凝胶染色与脱色方法，凝胶图谱的绘制与 ...

相关专题 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。 通常第一维电泳是等电聚焦，在细管中（φ1～3 mm）中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污剂的聚丙烯酰胺凝胶进行 ...

相关专题 质谱技术在蛋白鉴定等实验中具有不可忽视的作用，不过，目前的应用还不是特别广泛。那么，有问题了怎么解决呢?本文收集了相关的新手对于这项技术的常见问题与解决方法。希望能更好地帮助大家了解这项技术。 问题1. 一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级，什么时候做二级? 答：一级质谱鉴定的方式主要指胎指纹图谱(PMF)，即利用质谱仪精 ...

相关专题 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时 ...

相关专题 质谱法在蛋白分析鉴定等实验中具有不可忽视的作用，本文对其中的样本制备试剂用品、实验操作、质谱仪的选择、样品的选择等方面进行详细的介绍。另外，这方面的FAQ、著名网站等信息可点击蓝色的字体查看。 试剂耗材： Milli-Q water、Non-powder gloves、Face mask、Hat、10μl and 200&m ...

相关专题 ELISA实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。在实验结束时，我们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。 洗涤很重要 洗 ...

相关专题 我们知道，不少蛋白实验都离不开抗体。但是，即使抗体公司时不时推出新产品，许多蛋白还是没有相应的抗体，很多情况下我们只能望产品叹气的份了。而且，我们还要面对很多抗体无能为力的情况，比如观察蛋白在细胞内的运输。不过，有了各种各样的蛋白标签，您面对实验问题会从容不少哦。 遗传标签 蛋白标签大体可分为三大类：遗传标签、in vivo标签和 ...

相关专题 中文名：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG) 英文名称：Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside 用途：异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂不被细菌代谢而十分稳定因此被实验室广泛应用。IPTG 常用于需要诱导 β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与 X-G ...

相关专题 1)噬菌体DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表达菌株，噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，构建好的表达载体可以直接转入表达菌株中，诱导蛋白的表达方式与lac启动子一样都是IPTG诱导。 2)表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，T7 RNA 聚合酶编码基因以及lacUV5启动子，lacUV5启动子可 ...

相关专题 免疫胶体金技术专题 PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A的活性，又能保持高度的稳定性，PAg复合物分子最小易于穿透组织。PAg复合物的原液在4℃可保存达一年之久 ...

相关专题 Bradford法测蛋白质浓度 一、实验目的 配制一组浓度分别为0.10mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml，0 mg/ml的牛血清蛋白(BSA)溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度 ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 一、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 (一)、试剂： 1、考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G—2504.7%(W/V)乙醇，8.5% ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 一、药品的配制步骤 (一)、实验准备： 1、 准备所需的药品和玻璃仪器。 2、 洗涤。(怎样洗涤算干净?) (二)、计算： 1、百分比浓度计算： 1)、G/V比 例如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100ml 水。 2)、V/V比： 例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 考马斯亮蓝法也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining)又称Bradford法。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸 ...

相关专题 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时，常以比活(酶活力单位/mg蛋白)表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法有Lowry法和考马斯亮蓝G-250染料结合法。本实验将分别介绍这两种方法。 一、考马斯 ...

相关专题 LOWRY法蛋白定量专题 对许多实验来说，确定蛋白样品浓度是至关重要的。如果在2D电泳中，蛋白过多或过少，产生的后果都将是相当严重的。大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。在典型的蛋白测定中，化学试剂加入到蛋白样品溶液里产生颜色变化，这一变化可由分光光度计或酶标仪检测，并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。Bio–Rad 提供了4种蛋白测 ...

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