蛋白质技术

相关专题 Thermo Scientific Pierce近日推出了HiPPR去垢剂去除离心柱/离心板，可更快更彻底地从细胞裂解液及其他生物样品中去除去垢剂。这种即用型的产品适用于低浓度的蛋白及多肽样品。HiPPR树脂结合并去除去垢剂，同时很好地回收蛋白及多肽，便于下游的质谱分析。 大家都知道，去垢剂和表面活性剂是制备蛋白和多肽样品时常常 ...

相关专题 它们都是BSA 1、选择应用考马斯亮蓝方法测蛋白质量，做BSA标准曲线步骤时已经测得梯度蛋白量的吸光值。想求助：在excel中怎样做标准曲线。 Q1、很简单的，将蛋白质浓度放在一列，相应的吸光度放在一列，将两列选中后，选择插入图形，选散点图，然后在插入的图形上的点右击选择添加趋势线，并勾选显示公式和R值，即可得到方程式。 Q2、用梯 ...

相关专题 实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。 实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白通 ...

相关专题 7月，最新一期的冷泉港实验手册《Cold Spring Harbor Protocols》发布。按照惯例，有两篇protocol是可以免费阅读的，其中一篇介绍了如何验证蛋白-DNA相互作用的功能重要性。这篇文章节选自《真核生物的转录调控：概念、策略与技术》一书，是由美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）的研究人员撰写的。 鉴定与感兴趣 ...

相关专题 一、原理与方法 PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。 其方法是：在含有4mlPH5.8的0.2M磷酸氢二钠-0. ...

相关专题 研究者们在分离到某一基因后，要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即：有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的 ...

相关专题 一、mtt比色法检测细胞活性 (一)原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 (二)试剂准备 1、青链霉素溶液(100X)：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中抽滤除菌。 2、L1 ...

相关专题 技术起源&发展：iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由美国应用生物系统公司ABI 研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素编码的标签，通过特异性标记肽的氨基基团，尔后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含 ...

相关专题 1.目的 了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。 2.原理 外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长，lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG(异丙基硫代-b-D-半乳糖)，解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-PAGE或Western-bl ...

相关专题 一、原理 1.葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。(G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质) 2.利用离子交换法，选取DEAE-阴离子纤维素DE52柱材料，因为PPO是带有阳 ...

相关专题 在此我们着重讨论了水平条纹的原因和预防。在对任何双向条纹问题进行问题排查时，必须记住两件事：1)水平条纹是由第一向(等电聚焦或IEF)中的不完全聚焦引起的，而2)垂直条纹是由第二向(SDS-PAGE)中蛋白分离不佳引起的。 第一向的伏特小时数过量 延长聚焦时间不一定能提高分辨率。实际上，它可能引起水平条纹。一些蛋白样品更易聚焦，因 ...

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相关专题 生物实验中的封闭剂 大家好，这是我最近总结出的有关封闭的一些小知识，收集了一些封闭剂的种类，如何选用封闭剂等等。与大家分享。欢迎大家批评指正。 封闭的原理： 固相载体表面(如ELISA板，NC膜或者PVDF膜上等)有很多洞洞，通过电转或包被，胶上的蛋白被转移到了膜上，或抗原/抗体固定在板上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表 ...

相关专题 Western免疫印迹(western blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗 ...

相关专题 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关，还和蛋白质的分子量以及分子形状有关，其中蛋白质的等电点是最重要的影响因子，要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统; 2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性，所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度; 3. 蛋 ...

相关专题 一、原理 细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重 ...

相关专题 蛋白激酶与磷酸酶这两个词有些叫人难辨清楚。其实蛋白磷酸酶与蛋白激酶相辅相成，两者共同构成了细胞内磷酸化与去磷酸化的蛋白活性开关系统，而且对于细胞信号转导的作用也是相辅相成。 蛋白激酶可使蛋白质磷酸化，蛋白磷酸酶使蛋白去磷酸化。 蛋白磷酸化与去磷酸化是真核细胞信号转导的共同通路，其动态变化几乎涉及从胚胎发育到个体成熟的所有过程，包括 ...

相关专题 蛋白质的结构与功能作用 在生物体内，生物信息的流动可以分为两个部分：第一部分是存储于DNA序列中的遗传信息通过转录和翻译传入蛋白质的一级序列中，这是一维信息之间的传递，三联子密码介导了这一传递过程;第二部分是肽链经过疏水塌缩、空间盘曲、侧链聚集等折叠过程形成蛋白质的天然构象，同时获得生物活性，从而将生命信息表达出来;而蛋白质作为生命 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外还有 质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素.由于 Vector NTI suitor7.0软件模拟表达可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难所以本实验的工作主要针对载体拷贝数、载体稳定和宿主菌的生 ...

相关专题 在大肠杆菌中表达的蛋白质，首先由methionyl aminopeptidase酶在其N端切掉甲硫氨酸（Met），当+2位置的氨基酸具有较大的侧链基团时，会影响这种酶解反应的速度。(Hirel et al.1989;Lathrop et al.1992) 当蛋白质N端的甲硫氨酸保持完整的时候，它在E.coli细胞中会比较稳定。To ...