蛋白质技术

相关专题 它们都是BSA生物实验中的封闭剂 1.BSA封闭液的配制 石蜡切片做免疫荧光的时候用4%BSA in PBS +0.05% Tween 20 细胞免疫荧光的时候用 1%BSA in PBS + 0.05% Tween 20 2.0.1%BSA怎么配 直接用水配就行了!按体积比就行!看你干什么用!要是用来PCR可以用dd水配制! 3. ...

相关专题 Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋白蛋白结合，组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。在蛋白上样后，带有组氨酸标签的蛋白特异性结合到柱子里，其他的杂蛋白流出。Ni-NTA纯化介质是Ni离子金属螯合介质。 蛋白过镍柱纯化的原理：Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋白蛋白结合，组 ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 1.层析柱的选择 层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择。一般来讲，主要是层析柱的长度对分辨率影响较大，长的层析柱分辨率要比短的高;但层析柱长度不能过长，否则会引起柱子不均一、流速过慢等实验上的一些困难。一般柱长度不超过100cm，为得到高分辨率，可以将柱子串联使用。层析柱的直径和长度比一般在 ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 1.上样 亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短，通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件，包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度、温度等，以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。 一般生物大分子和配体之间达到平衡的速度很慢，所以样品液的浓度不易过高，上样时流速应比较慢，以保证样品 ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一 ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 超滤技术存在的主要问题是超滤膜污染。超滤膜在使用过程其性能随着时间的增加，膜透过流速会迅速下降，同时对溶质的阻止率也会明显上升，这是由膜的劣比的附生污垢所引起的。膜易出现污染与堵塞，膜的使用寿命相对较短，有必要对超滤膜的再生进行研究。解决办法一方面是加强料液的前处理，另一方面是对超滤膜的清洗方法的研究。 超滤法的应 ...

相关专题 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，样品制备完成。 蛋白质提取液：300 ...

相关专题 该方法是双缩脲法的发展，包括两步反应： (1)在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。 (2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原，混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物)，颜色深浅与蛋白质含量成正比。此方法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100倍，定量范围为5~100μg蛋白质。FolIn试剂显色反应由酪氨 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略蛋白纯化技术专题 Purification of GST fusion proteins in E.coli GST Sugden labMcArdle Laboratory for Cancer ResearchUniversity of Wisconsin-Madison Medical School Scre ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50～60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的 ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。 柱子可以分为：加压，常压，减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的， ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 各种His.Bind基质的产品如何选择：本文介绍带Ni NTA琼脂糖、无Ni IDA琼 脂糖、带Ni的IDA琼脂糖预装柱、无Ni IDA触须甲酰化、带Ni的IDA纤维素预装筒、带Ni的IDA磁性琼脂糖……等His.Bind基质的特点和应用。 His.Bind基质选择指南：与任何纯化介质一样，His.Bind树脂在接 ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 蛋白纯化试剂盒主要是利用蛋白与亲和介质的亲和能力不同达到蛋白分离纯化的目的。蛋白纯化试剂常见的蛋白标签有GST标签、HIS 标签等，本文主要介绍了蛋白纯化试剂盒的原理、His Tag 蛋白纯化方法试剂选择的方法、GST 标签融合蛋白纯化问题分析等。 蛋白抽提试剂盒和蛋白纯化试剂盒用途有什么不同? 蛋白抽提试剂盒是从 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 一、原理 1、E .coli 表达系统 E .coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E .coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。 2、外源基因的诱导表达 提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达 ...

相关专题 来自芝加哥大学癌症生物研究所，本·梅癌症研究中心等处的研究人员发明了一种能同时检测大量蛋白的新方法，彻底改变目前我们进行癌症和其它疾病蛋白表达水平检测的技术面貌，这种新方法效果与传统的Western Blotting一样好，但是时间可以大大缩短，比传统Western Blotting快48倍。这一研究成果公布在《Nature Me ...

相关专题 2011年鄙人做western的时候，发现目前的资料都很老，网上的资料也大多互相传抄，说法各异，于是综合了目前网上所能找到的资料和个人实际经验，编辑了这份western blot操作步骤2012版，内容包括主要操作步骤和所需要注意的有用的细节，并附上参考文献(原谅我无法像Endnote那样一一注明文献出处，只能大概标注出引用的参考 ...

相关专题 避免蛋白降解 总体规则：蛋白酶普遍存在，在提取蛋白质的步骤中，早些抑制，经常抑制 分装蛋白溶液，储存于不同的温度和不同的缓冲液中，测蛋白活性，找出最适储存条件。 冷藏，并加入稳定剂。这些稳定剂一般都能充分保持蛋白的生物学活性。 将蛋白溶液储于50%(V/V)的甘油或悬于硫酸铵(3.2M)中，避免冻存 冰结晶会造成物理剪切及蛋白变性 ...

相关专题 主要包括以下 4 个基本步骤：样品制备;电泳分离;蛋白的膜转移;免疫杂交与显色――蛋白检测。 溶液和试剂 1. 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) 2. ModifiedRIPAbuffer：Tris-HCl:50 mM pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ; ...

相关专题 膜蛋白具有多种功能，在细胞识别、细胞信号转导、运输等有着中着重要的角色，因此也是极佳的药物靶点。抽提膜蛋白主要是进行蛋白组分析：常用的实验是非变性胶电泳、酶活分析、SDS-PAGE、western blot等。本文叙述了总蛋白的抽提方法、和膜蛋白的提取方法。 一、从新鲜样品中提取总蛋白(简易法) 1、自配裂解液(pH 8.5-9. ...

相关专题 我们知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20o C或-80o C条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常 ...