蛋白质技术

相关专题 蛋白表达技术全攻略 一、mtt比色法检测细胞活性 (一)原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 (二)试剂准备 1、青链霉素溶液(100X)：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中抽 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 真核细胞常见表达载体 1. pCMVp-NEO-BAN载体 特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成， 在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。更重要的是，由于该真核细胞表 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 我想表达遇到的第一个瓶颈估计就是为什么我的外源片段插到载体里面，PCR鉴定没问题，双酶切也OK，可是就是不见表达。一般我们是如何判断没有表达呢?大多都是首先进行SDS-PAGE。在跑胶的时候一定要设对照，比较严谨的电泳对照，应该是：Marker，标准品阳性对照(如果有，且打算做Western的话)，以及空白载体( ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 很多朋友问这样一个问题：为什么毕赤酵母不表达? 他们自己也很纳闷，重组酵母PCR检测也证明目的基因重组了，但是诱导之后就是在表达上清中检测不到目的蛋白，仔细研究操作手册后仍然不知道原因。 本人，根据自己的经验，采用倒推的方法，按实验过程从后向前分析，供大家参考： 1、诱导之后表达上清中检测不到目的蛋白： 分析1： ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 人们合成与生物相关的物质是从尿素开始的，1828年，德国化学家维勒人工合成了存在于生物体的这种有机物。在1960年我国科学家采用化学方法首次成功地合成了具有生物活性的蛋白质――胰岛素。随着内切酶的发现和基因工程技术的发展，人们发现用各种不同的载体在原核、真核系统中进行蛋白表达更为行之有效。而这其中大肠杆菌表达系统 ...

相关专题 想和大家讨论讨论原核表达载体 原核表达载体，如pet系列，型号从小到大，那么多，往往让新手选择起来不知所措。所以希望和大家讨论讨论到底他们是怎么演变的，每个的优缺点，是不是号越大的就越好等新手们往往困惑不已的问题。 希望下面的讨论分系列进行，如pet系列、pgex系列等 这篇文章是我从网上找的关于pet载体的介绍，只要你耐心的看完 ...

相关专题 它们都是BSA生物实验中的封闭剂 1、BSA牛血清白蛋白在PCR中的作用是什么?它的作用机理是什么? BSA will coat the tube walls preventing the template from being absorbed. This will reduce the frequency of primer d ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 本指南介绍了大规模和小规模GST蛋白表达和纯化的方法。由于蛋白的多样性，因此推荐先进小规模表达及纯化测试。 材料与试剂 1. IPTG (Sigma) 2. 咪唑 (Sigma) 3. 蛋白酶抑制剂 (Roche) 4. 溶菌酶(Sigma) 5. 谷胱甘肽 琼脂糖 4B 珠 (Pierce 15160) 6. ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 如何做原核表达 之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的pET系列载体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克(Merck)公司，它是 国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darmstadt，已有300多年 的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建 有62个生产基地。 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在，需要不同的纯化策略。现在，许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能，这些自然需要将蛋白质分离出来后，进行进一步的研究来获得。 分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必须承认，蛋白质纯化比起DNA 克隆和操作来是更具有艺术性的，尽管DNA 序列具有异乎寻常的多样性(因 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然，它也存在一些缺乏高级修饰、 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 1、问：我用毕式酵母表达一个27KD的蛋白，小量表达并做SDS-PAGE有一条类似三聚体的条带。用大量表达，表达上清用镍柱进行亲和层析，在FPLC上可以看到一个大峰，但跑电泳却没有发现条带，为什么呢?请赐教 参考见解：你在大量表达后有没有跑电泳检测?表达上清用镍柱亲和层析后洗脱液有没有电泳检测?你首先要做的是:1 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。本文主要概述了 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 试验的注意事项 1、信号肽识别位点的设计 以质粒pPICZαA为例。在利用PCR反应在外源基因两端引入酶切位点的试验中。如果质粒pPICZαA双酶切中丢失了KEX2蛋白酶的酶切位点Lys-Arg，应该在上游中，增加了编码Lys、Arg的密码子AAA、AGA 。酵母细胞膜中中的KEX2蛋白酶 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在，需要不同的纯化策略。现在，许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能，这些自然需要将蛋白质分离出来后，进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必须承认，蛋白质纯化比起DNA克隆和操作来是更具有艺术性的，尽管DNA序列具有异乎寻常的多样性(因而它是 ...

相关专题 分子量测定的实验方法与强兵利器 蛋白质 分子量（单位：dalton） 肌球蛋白 甲状腺球蛋白 β-半乳糖苷酶 副肌球蛋白 磷酸化酶a 血清白蛋白 L-氨基酸氧化酶 地氧化氢酶 丙酮酸激活酶 谷氨酸脱氢酶 ...

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相关专题 蛋白表达技术全攻略 &NBSp; 你还在用E.col做基因表达的研究吗?有点跟不上发展的脚步咯。新兴且发展迅速前途无限的甲醇酵母系统正越来越被人们熟知和看好。本文对这一新的基因表达系统的特点和科研进展做详细的介绍。 1 甲醇酵母表达系统的特点 1.1 宿主 七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白(SCP)有很好的发酵基础菌体密 ...

相关专题 赖氨酸是人体必需氨基酸之一，能促进人体发育、增强免疫功能，并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。 &NBSp; &NBSp; 缺乏赖氨酸的症状包括疲劳，虚弱，恶心，呕吐，头晕，没有食欲，发育迟缓，贫血等。可以在医疗专业人员议下 ...

相关专题 它们都是BSA A、请问各位高手在进行免疫荧光的实验时浸一抗之前要用的封闭液中1%的BSA是怎么配制? 封闭液封闭后还用PBS清洗干净再浸一抗吗? 1.可以直接用0.02M的PBS配制 2.不用PBS清洗干净，直接浸一抗。 B、各位高手，间接法中我想摸索封闭液BSA的最佳浓度，用抗原包被后，用不同浓度的BSA(0.5%，1%，2%， ...