蛋白质技术

相关专题 提取样品的总RNA后，一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构，因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳，得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。 一、试剂： DEPC（Sigma公司产品），MOPs（Bocherigmer公司产品），甲酰胺（Formamide，Sigma公司产品），溴酚蓝（Bromph ...

相关专题 1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子 ...

相关专题 试剂： 1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8)5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在-20℃保存数月。 2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定 ...

相关专题 (一)第一向等电聚焦 1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT，不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管)，置室温溶解。 2.在小管中加入0.01g DTT，Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。 3.从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。 4.从冰箱中取-2 ...

相关专题 1. 探针的标记： (1) 如下设置探针标记的反应体系：待标记探针 (1.75pmol/微升) 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 1微升Nuclease-Free Water 5微升ATP(3，000Ci/mmol at 10mCi/ml) 1微升T4 Polynucleotide ...

相关专题 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS-PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论： Q：SDS-Page电泳的基本原理? A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠)，SD ...

相关专题 (一)原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不相同。在实验中，电泳凝胶分为 ...

相关专题 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的?预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗?电泳1-2小时再加结合反应产物吗? 预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂，提高分辨率，不加任何物质，一般30-60分钟后加样电泳。 2. 银染的步骤是什么?银染的关键因素是什么? 步骤是： (1) 固定：10%冰乙酸30min。 ...

相关专题 SDS-PAGE电泳可用于分离蛋白质和核苷酸，这里综述了SDS-PAGE实验原理、试剂和器材、以及实验操作步骤。 一. 实验原理： SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使 ...

相关专题 本实验的主要目的是掌握RNA琼脂糖凝胶电泳的操作技术，总结了RNARNA琼脂糖凝胶电泳的原理、实验材料、试剂及器具、操作步骤及注意事项。 一、实验目的 学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。 二、实验原理 RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变 ...

相关专题 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳主要涉及两个过程：一、血清脂蛋白的预染;二、预染的血清脂蛋白电泳分离。本文总结了血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳、试剂与器材以及操作步骤。 原理： 将血清脂蛋白用脂类染料(如苏丹黑或油红O等)进行预染.再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离.通电后脂蛋白向正极移动并分离为几个区带. 试剂与器材： 1、巴比缓 ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白和寡核苷酸的分离，最常用于蛋白质的分离，这里总结了DNA电泳专用的各种浓度PAGE胶配制的配方及制备方法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质。聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺（CH2=CHCONH2 ...

相关专题 Western Blot技术专题 western blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。 虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 限制性内切酶可特异性的识别DNA序列上特定的核苷酸序列位点，一般购买限制性内切酶说明书上都会有一定的反应体系，酶切体系在一定温度放置一定时间后，需要进行DNA琼脂糖电泳验证或者回收酶切效果。 实验原理 1、DNA的限制性酶切 限制性内切酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位 ...

相关专题 &NBSp; 电泳切胶注意事项： 1、电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源DNA污染。 2、切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3、关于防护，在一般有机玻璃后就 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 琼脂糖凝胶电泳是分子实验的基础技术，电泳迁移速率主要受到一些因素影响DNA的分子大小、DNA分子的构象、琼脂糖浓度、嵌入染料的存在、电源电压、离子强度影响。 实验原理 一、DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA。它可 ...

相关专题 1%的RNA琼脂糖凝胶电泳可以用来检测RNA的完整性，本实验的主要目的是熟悉植物总RNA非变性胶电泳操作原理和操作方法与步骤。 一、实验目的 掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。 二、实验原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。 ...

相关专题 SDS-Page凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) ...

相关专题 单细胞凝胶电泳(又名彗星实验)的操作流程主要包括单细胞悬液的制备、凝胶板制备、细胞裂解与解旋、电泳与中和、染色和观察等步骤。本文总结了单细胞凝胶电泳操作步骤和注意事项，希望对初入实验的同学有帮助。 1、分离制备单细胞悬液： (1)体外培养的细胞株：用胰酶消化，最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。 ...

相关专题 DNA跑完电泳后，需要进行带型分析，电泳图上的带型可能有出现许多状况。那么如何根据DNA电泳带型结果调整自己的实验呢?这里简单的做个介绍。 DNA电泳需要进行带型分析，在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此，对DNA带型做了相应的分析。带型原因分析解决办法弱带或无带上样的DNA量不够增加DNA的上样量，聚丙烯酰 ...