蛋白质技术

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相关专题 生命科学领域发生的革命性变化，对生命活动的研究正在从传统的还原式研究转向了整体性的研究——以基因组学(功能基因组学)和蛋白质组学为基础的系统生物学。其中蛋白质组学包括表达蛋白质组学(expression proteomics)、结构蛋白质组学(structural proteomics)和功能基因组学(functional pro ...

相关专题 重组DNA技术工具酶限制性核酸内切酶产品选择专题 实验目的 1. 学会DNA限制性内切酶酶切技术。 2. 琼脂糖凝胶电泳法观察酶切DNA的结果。 实验原理 质粒pUC118上有限制性内切酶BamHI的识别序列G↓GATCC，用BamHI酶切后形成线性质粒DNA。琼脂糖凝胶电泳可以按酶切产物分子量的大小分离DNA片段，小片段 ...

相关专题 等点聚焦电泳主要是依据不同的蛋白质分子等电点不同而对蛋白质进行分离的技术。本文主要等点聚焦电泳中对电聚焦的优缺点、等点聚焦原理、仪器与试剂、两性电解质、密度梯度等电点聚焦等方面进行描述。 一、电聚焦的优缺点： 电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 一、实验目的 1.通过对DNA的酶切，学会设计构建体外重组DNA分子; 2.根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶; 3.掌握DNA的酶切技术。 二、实验原理 限制性内切酶是从细菌中分离出来的一种能在特异位点切割DNA分子的核酸内切酶，目前已从多种细菌中分离出超过400种，识别各自不同的核苷酸顺序，这一顺序大多 ...

相关专题 限制性核酸内切酶产品选择专题 一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株(品系)。例如，从Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性内切酶称为Bam H，在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号，如HindII、HindIII，HpaI ...

相关专题 PAGE胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳）主要是以PAGE为介质，根据DNA分子大小和电荷分离DNA分子。PAGE胶电泳采用银染法进行显色。银染的原理：一、银离子（一般是AgNO3)和DNA结合;二、还原剂甲醛把Ag+还原成银颗粒，最终DNA呈现为黑褐色。 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根 ...

相关专题 学生物的人对琼脂、琼脂糖这两个词一定都不会陌生。不过它们是同一样东西抑或有所差别呢?我想不少人都会犯迷糊了。没关系，且听我细细讲来。 首先，琼脂和琼脂糖不光中文叫法有点区别，它们的英文名字也是不同的。先来说说琼脂，它的英文名为agar。这个词来源于马来语的agar-agar，意思是胶状物。而琼脂糖的英文名为agarose，天然琼脂 ...

相关专题 本文总结了金普泰质粒提取纯化试剂盒的使用步骤，可以根据提取的规模和质量要求选择适合实验的的纯化试剂盒。 金普泰生物柱离心式去内毒素超纯质粒小量抽提试剂盒说明书： wash A wash B和wash C: 用前按照试剂 瓶上标明的量分别加入分析纯异丙纯或95%的分析纯乙醇，充分混匀，用后盖紧盖子。 用1ml ddH2O (灭菌)完 ...

相关专题 RNA电泳包括非变性和变性凝胶电泳两种，非变性电泳可以分离不同分子量大小的RNA，由于RNA分子具有二级和三级结构，这些结构会影响电泳结果，所以分变性电泳无法确定其分子量，而只有在变性的条件性，RNA分子才能完全伸展开。 一、实验目的 学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。 二、实验原理 RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测 ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇 非变性凝胶电泳也称为天然凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用与变性凝胶电泳最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后都不会变性.最主要的有以下几点: 1. 凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS而变性凝胶的有SDS. 2 ...

相关专题 SDS-PAGE电泳主要利用聚丙烯酰胺的分子筛效应分离蛋白质和核酸，SDS-PAG蛋白质电泳分析可从蛋白质亚基分子量的大小就分离蛋白质。 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS-Page电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一 ...

相关专题 二维电泳即双向电泳，是蛋白质分析常用的技术手段。第一向等电聚焦电泳：根据蛋白的等电点分离蛋白质;第二向SDS-PAGE电泳：根据蛋白分子量的大小分离蛋白质。本文总结了二维电泳中常见的14个问题及其解答。 1. 重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽，直接跑 2D 的一向吗? 一般情况下是可以的。但当上样量特别大时，可能会有一部分蛋 ...

相关专题 尽管有了教科书、仪器说明书、产品操作指南和网络教程，但周围仍存在着多种错误的操作步骤，使电泳运行反复出现问题，并导致不适当的结果。迷你系统的相对低分辨率以及短运行时间常常掩盖了这些问题。然而，在大型凝胶的高分辨率双向电泳中，这也是蛋白质组学中最重要的分离方法之一，这些错误的后果会变得更为明显。来自GE Healthcare Lif ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇 改进一：配胶 背景：在配制SDS-Page胶的时候，加入分离胶的过程中常常会带入气泡，即使用双蒸水来压平界面也有可能因为力度不匀而导致胶面不够齐平，最后使跑出来的相同大小的蛋白条带不在同一个水平面上。 方法改进：所做的改进很简单却很有效，加完分离胶后，用移液枪吸取酒精(浓度没有特别要求，干 ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇 SDS-Page因易于操作，而具有广泛的用途，是许多研究领域的重要的分析技术。 1. 蛋白质纯度分析； 2. 蛋白质分析量的测定，根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量； 3. 蛋白质浓度的测定； 4. 蛋白质水解的分析； 5. 免疫沉淀蛋白的鉴定； 6. 免疫印迹的第一步； 7. 蛋白质修 ...

相关专题 成功走出第一步：DNA提取 实验目的： 1.熟悉分子生物学实验的操作特点。 2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。 3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。 4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。 实验原理： 用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，加入SDS破裂核膜，用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来，经苯酚﹑氯仿抽提 ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇 1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很 ...

相关专题 电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常 ...

相关专题 电泳仪的使用方法和产品推荐电泳设备专题 1.电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。 2.仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。 ...