蛋白质技术

相关专题 中文名：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG) 英文名称：Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside 用途：异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂不被细菌代谢而十分稳定因此被实验室广泛应用。IPTG 常用于需要诱导 β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与 X-G ...

相关专题 免疫胶体金技术专题 PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A的活性，又能保持高度的稳定性，PAg复合物分子最小易于穿透组织。PAg复合物的原液在4℃可保存达一年之久 ...

相关专题 Bradford法测蛋白质浓度 一、实验目的 配制一组浓度分别为0.10mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml，0 mg/ml的牛血清蛋白(BSA)溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度 ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 一、药品的配制步骤 (一)、实验准备： 1、 准备所需的药品和玻璃仪器。 2、 洗涤。(怎样洗涤算干净?) (二)、计算： 1、百分比浓度计算： 1)、G/V比 例如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100ml 水。 2)、V/V比： 例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 一、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 (一)、试剂： 1、考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G—2504.7%(W/V)乙醇，8.5% ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 考马斯亮蓝法也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining)又称Bradford法。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸 ...

相关专题 本法用于微量蛋白质的含量测定。蛋白质在碱性溶液中可形成铜-蛋白复合物，此复合物加入酚试剂后，产生蓝色化合物，该蓝色化合物在波长650nm处的吸光度与蛋白质的含量成正比，根据供试品的吸光度，计算供试品的蛋白质含量。 试剂 (1) 酚试剂 称取钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g、钼酸钠(Na2MnO4·2H2O)25g置1500 ...

相关专题 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时，常以比活(酶活力单位/mg蛋白)表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法有Lowry法和考马斯亮蓝G-250染料结合法。本实验将分别介绍这两种方法。 一、考马斯 ...

相关专题 一、 实验目的 1、 了解测定蛋白质的常用方法 2、 掌握蛋白质含量测定的经典Lowry – Folin法。 二、 实验原理 在碱性溶液中，蛋白质中的肽键与铜盐可产生双缩脲反应，产生络合物，此络合物会将磷钼酸-磷钨酸试剂还原，产生深蓝色复合物。在一定的条件下，蓝色深浅与蛋白质的量成正比。在波长540nm处测定样品的吸光度，与标准曲 ...

相关专题 LOWRY法蛋白定量专题 对许多实验来说，确定蛋白样品浓度是至关重要的。如果在2D电泳中，蛋白过多或过少，产生的后果都将是相当严重的。大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。在典型的蛋白测定中，化学试剂加入到蛋白样品溶液里产生颜色变化，这一变化可由分光光度计或酶标仪检测，并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。Bio–Rad 提供了4种蛋白测 ...

相关专题 酵母双杂交技术专题 LexA酵母双杂交系统简介 一、LexA酵母双杂交系统的设计原理 报告质粒p8op-LacZ的GAL4 UAS编码序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下，报告基因LacZ的转录活性为零，该基因的筛选标志为URA3，可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因组 ...

相关专题 酵母双杂交技术专题 1.构建CaM诱饵质粒 ① PCR 扩增CaM基因的开放阅读框，正向和反向引物分别加接酶切位点。 ② 扩增得到的CaM插入T载体( T–CaM) 。 ③ T–CaM和pGBKT7 质粒分别双酶切。 ④ 胶回收目的DNA。 ⑤ 将CaM连入pGBKT7，构建成表达载体pGBKT-CaM，转化大肠杆菌DH5&alp ...

相关专题 酵母双杂交技术专题 1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办? 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收 ...

相关专题 蛋白激酶将磷酸基团从ATP转移到蛋白多肽底物上的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基，直接影响目标的活性和功能。放射性研究表明，真核细胞中大约30%的蛋白经过磷酸化修饰。这一关键的翻译后修饰调控了广泛的细胞活性，包括细胞周期、分化、代谢和神经元通讯。此外，异常的磷酸化事件与许多疾病状态相关。在评估磷酸化时，选择的方法可能会有所不同，这取决于 ...

相关专题 不同的蛋白质分离纯化的方法不同，但蛋白质分离纯化的操作步骤基本类似，那么如何进行细菌蛋白的提取呢？这里总结细菌蛋白的提取的实验试剂、操作步骤以及一些注意事项。 实验试剂 采用T7• Tag Affinity Purification Kit T7•Tag抗体琼脂。B/W缓冲液：4.29mM Na2HPO4，1. ...

相关专题 Folin—酚法蛋白质含量测定法是最为灵敏的方法，但其试剂也不容易配制。本实验的主要目的是掌握分光光度计的使用方法，学习Folin—酚法测定血清蛋白的含量。 一、目的 1、学习分光光度计的原理和使用方法。 2、学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 3、进一步掌握比色法或分光光度法，准确测定未知样品。 二、原理 蛋白质浓 ...

相关专题 限制性核酸内切酶产品选择专题 一、限制性内切酶对DNA消化的方案 1.限制性内切酶反应在灭菌的0.5ml离心管中进行。 2. 20μl体积反应体系如下： DNA 0.2-1 μg 10×酶切buffer 2.0 μl 限制性内切酶 1-2 u(单位) 加ddH2O 至 20 μl 限制性内切酶最后加入，轻轻混 ...

相关专题 纸层析法是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。本文主要介绍了纸层析法分离鉴定氨基酸的实验原理、器材和具体操作步骤。 纸层析法 一、目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂和水组成 ...

相关专题 蛋白质在PH等于等电点时，溶解度最小。本文主要介绍了利用沉淀实验测定蛋白质等电点的实验原理、器材、试剂和具体操作步骤。 蛋白质PH位于等电点时溶解度最低 一、蛋白质等电点的测定 1、目的 (1)了解蛋白质的两性解离性质。 (2)学习测定蛋白质等电点的一种方法。 2、原理 蛋白质是两性电解质。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶 ...

相关专题 印迹(blotting)是生物学实验中常用的检测和分析方法。印迹(blotting)实验的过程可以简单描述为将待检测的生物大分子经电泳等方法分离后转移并固定在膜(如：硝酸纤维素膜、PVDF膜、尼龙膜)上，然后用特异性识别物质(如探针)去识别，最后经显色反应(同位素放射自显影、荧光、化学发光等)在膜上显示出结果------印迹。 最 ...