蛋白质技术

相关专题 研究者们在分离到某一基因后，要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即：有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的 ...

相关专题 双向电泳IEF (sigma)IEF(not IPG)/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做“热”的所谓蛋白质组的，嘻嘻! IEF用Biorad的圆盘电泳槽(不行用国产的吧，不推荐)，SDS-PAGE用六一厂的就可以了(ft，六一厂应该给我money吧，给你做广告了)(money不是很多的强烈 ...

相关专题 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关，还和蛋白质的分子量以及分子形状有关，其中蛋白质的等电点是最重要的影响因子，要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统; 2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性，所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度; 3. 蛋 ...

相关专题 一、原理 细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重 ...

相关专题 Western免疫印迹(western blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗 ...

相关专题 蛋白激酶与磷酸酶这两个词有些叫人难辨清楚。其实蛋白磷酸酶与蛋白激酶相辅相成，两者共同构成了细胞内磷酸化与去磷酸化的蛋白活性开关系统，而且对于细胞信号转导的作用也是相辅相成。 蛋白激酶可使蛋白质磷酸化，蛋白磷酸酶使蛋白去磷酸化。 蛋白磷酸化与去磷酸化是真核细胞信号转导的共同通路，其动态变化几乎涉及从胚胎发育到个体成熟的所有过程，包括 ...

相关专题 蛋白质的结构与功能作用 在生物体内，生物信息的流动可以分为两个部分：第一部分是存储于DNA序列中的遗传信息通过转录和翻译传入蛋白质的一级序列中，这是一维信息之间的传递，三联子密码介导了这一传递过程;第二部分是肽链经过疏水塌缩、空间盘曲、侧链聚集等折叠过程形成蛋白质的天然构象，同时获得生物活性，从而将生命信息表达出来;而蛋白质作为生命 ...

相关专题 在大肠杆菌中表达的蛋白质，首先由methionyl aminopeptidase酶在其N端切掉甲硫氨酸（Met），当+2位置的氨基酸具有较大的侧链基团时，会影响这种酶解反应的速度。(Hirel et al.1989;Lathrop et al.1992) 当蛋白质N端的甲硫氨酸保持完整的时候，它在E.coli细胞中会比较稳定。To ...

相关专题 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300m ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外还有 质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素.由于 Vector NTI suitor7.0软件模拟表达可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难所以本实验的工作主要针对载体拷贝数、载体稳定和宿主菌的生 ...

相关专题 分子量测定的实验方法与强兵利器 一、实验目的和内容 目的：1. 通过本次实验的学习与操作，使学生在实验过程更好的理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)测定蛋白质纯度与分子量的原理与依据; 2. 要求学生掌握电泳原理以及SDS-Page垂直板电泳分离蛋白质技术; 3. 熟悉垂直板电泳操作原理和方法，凝胶染色与脱色方法，凝胶图谱的绘制与 ...

相关专题 蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了下几个蛋白纯化实验中的遇见的问题及其解决方式。 1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲 ...

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 当大家都全副武装，冒着生命危险使用致癌的DEPC时，是否有想过，其实，还有更安全环保的替代品——蛋白酶 K 的妙用，那么蛋白酶 K 的威力何在，使用过程中该注意哪些方面呢?本文从互联网上摘得不少资料，希望能对大家有帮助。 (不过有一点还是要声明，我没有使用该方法制备的水用于溶解 RNA。原因 ...

相关专题 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。 通常第一维电泳是等电聚焦，在细管中（φ1～3 mm）中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污剂的聚丙烯酰胺凝胶进行 ...

相关专题 质谱法在蛋白分析鉴定等实验中具有不可忽视的作用，本文对其中的样本制备试剂用品、实验操作、质谱仪的选择、样品的选择等方面进行详细的介绍。另外，这方面的FAQ、著名网站等信息可点击蓝色的字体查看。 试剂耗材： Milli-Q water、Non-powder gloves、Face mask、Hat、10μl and 200&m ...

相关专题 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时 ...

相关专题 质谱技术在蛋白鉴定等实验中具有不可忽视的作用，不过，目前的应用还不是特别广泛。那么，有问题了怎么解决呢?本文收集了相关的新手对于这项技术的常见问题与解决方法。希望能更好地帮助大家了解这项技术。 问题1. 一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级，什么时候做二级? 答：一级质谱鉴定的方式主要指胎指纹图谱(PMF)，即利用质谱仪精 ...

相关专题 ELISA实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。在实验结束时，我们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。 洗涤很重要 洗 ...

相关专题 我们知道，不少蛋白实验都离不开抗体。但是，即使抗体公司时不时推出新产品，许多蛋白还是没有相应的抗体，很多情况下我们只能望产品叹气的份了。而且，我们还要面对很多抗体无能为力的情况，比如观察蛋白在细胞内的运输。不过，有了各种各样的蛋白标签，您面对实验问题会从容不少哦。 遗传标签 蛋白标签大体可分为三大类：遗传标签、in vivo标签和 ...

相关专题 1)噬菌体DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表达菌株，噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，构建好的表达载体可以直接转入表达菌株中，诱导蛋白的表达方式与lac启动子一样都是IPTG诱导。 2)表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，T7 RNA 聚合酶编码基因以及lacUV5启动子，lacUV5启动子可 ...