PCR技术

末代沙皇尼古拉二世、1918年的流行性感冒病毒、电影《侏罗纪公园》，以及辛普森杀妻案，这四件事情到底有什么相关？答案是没有。只不过近十几年来生物技术的一项新发明，把它们给连在一块了。这项技术就是“聚合酶链反应”（polymerase chain reaction，PCR）。 PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年 ...

一、条带宽不超过1mm，边缘整齐； 二、条带在期望的碱基大小之内； 三、背景上无smears也无引物二聚体的出现则是PCR扩增失败，而非阴性反应； 四、如果出现期望的碱基大小之外的其它条带，不管是否有期望大小的条带，均应作为人工假像看待； 五、在临床标本检测时，尤其对于肿瘤标本，除预期条带外，经常有以外条带或smear现象，但只要其亮度明显低于目的条带，也应视为阳性； 六、对于某些情况，尤其在自 ...

平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PC ...

PCR-SSCP分析的基本程序为：首先PCR扩增特定靶序列，然后将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，DNA单链的迁移率除与DNA链的长短有关外，更主要的是取决于DNA单链所形成的构象。在非变性条件下，DNA单链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象。这种构象由DNA单链碱基决定，其稳定性靠分子内局部顺序的相互作用（主要为氢键）来维持。相同长度 ...

变性梯度胶凝电泳(DGGE)能够将具有单个碱基差别的DNA分子分离开来。分离以 DNA在溶液中的解链特性为基础。以温度或变性剂浓增高时，DNA分子在不同的区域相 对应的解链温度称为基础。解链区域的长度从25个碱基对到数百个碱基对不等，与每 一个解链区域相对应的解链温度称为解链温度(Tm)。由于一个DNA链上相邻碱基间的 堆积作用在DNA双螺旋的稳定上起着相当重要的作用，因此解链区域的Tm值主要取决 ...

PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带。 PCR反应的关键环节有 ①、模板核酸的制备 ②、引物的质量与特异性 ③、酶的质量 ④、PCR循环条件。 寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①、模板中含有杂蛋白质；②、模板中含有Taq酶抑制剂；③、模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白；④、在提取制备模 ...

We routinely produce dsRNA by in vitro transcription of a PCR generated DNA template containing the T7 promoter sequence on both ends (I. Primer Designed dsRNA). It is also possible to produce dsRNA u ...

(1) Core out a single well separated plaque from the agar plate using a 200µl pipette tip and place it into 500µl of SM buffer in a 1.5ml microtube: SM buffer 5.8g of NaCl 2.0g of M ...

来自上海某研究所的某博士的研究课题是寻找导致某种疾病的相关基因，最近他获得了这一疾病的微卫星家族标记图谱，但是这种串联重复的微卫星位点并不能完全满足他的分析要求，因此他决定转向作单核苷酸多态性SNPs（single nucleotide polymorphism，发音为“snips”）基因分型。 确实，如果你的研究课题也是寻找易感基因，那么SNPs是一种比较而言可行而且高效 ...

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　　一、 材料 　　基因组 DNA (大于50kb分别来自不同的材料)。 　　二、设备 　　电泳仪及电泳槽， 照相用塑料盆5只，玻璃或塑料板(比胶块略大) 4块，吸水纸若干，尼龙膜(依胶大小而定)，滤纸 ，eppendorf管(0.5ml)若干。 　　三、试剂： 　　1、限制性内切酶(BamHⅠ EcoRⅠ HindⅢ XbaⅠ)及10×酶切缓冲液。 　　2、5&time ...

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