PCR技术

定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型： （1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测，易出现 ...

SNP位点信息已知的情况下， 选择SNP的GENOTYPING的方法，主要根据你的经费情况设计，我分别给你分析一下现状： A一般实验室： 经费一般， 仪器不具备时， 最多用的是以下两种方法： 1、 基于PCR的方法，也叫AS-PCR， (ALLELE-SPECIFIC PCR)的办法，园子里这方面的东西不少，特别是在遗传发育版面应该很多。 主要原理是利用引物在扩增时3'端相对高的BASE要求，进行 ...

1、多态性是一个群体概念，多态性指这个差异占群体的1%以上。否则就叫突变（小于1%）。 2、SNP是多态性中的一种，只是进一步限定了差异只是单碱基。 3、SNP一般来说，是全部体细胞一样的基因型（除开嵌合体）。 4、突变一般不是一个个体全部细胞的变化。 5、如果突变发生在生殖细胞，则可以遗传，但是只要这个突变群没有达到总群体的1%，它就只是一个突变株/系。达到了1%就是多态性了。 ...

目前已有多种方法可用于SNP检测，如根据DNA列阵的微测序法、动态等位基因特异的杂交、寡聚核苷酸特异的连接、DNA芯片以及TaqMan系统等。但不管哪一种方法，首先必须进行靶序列的扩增，然后才能进行其它检测。 传统的SNP检测方法是采用一些已有的成熟技术，如DNA测序、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)、单链构象多态性(SSCP)、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交(ASO)等。这些技术虽在某种程度上 ...

The In Situ PCR: Amplification and Detection in a Cellular Context Ernest F. Retzel Katherine A. Staskus Janet E. Embretson and Ashley T. Haase Department of Microbiology University of Minnesota Minne ...

1.实时PCR原理 对扩增产物进行可重复性的定量长期以来一直是科学家和研究者的目标。传统的方法需要对终产物进行凝胶电泳分析。这种方法可以确定目的产物和竞争产物的大小，估算纯度，计算条带强度。然而，所用扩增试剂和体系的变动会造成扩增的终产物的重复性有较大的变动，成为这种方法的主要弊端。 扩增过程的指数期提供给我们最有用的，可重复的数据。在起始的目的DNA量与循环过程的指数期的扩增产物量之间存在着定量 ...

基因芯片技术具有快速多样、微型化和自动化等特点在生物医学领域广泛的应用。但由于其基本原理是基于核酸杂交技术，有着内在的缺陷，实验的敏感性和重复性都存在一定问题。核酸杂交较适合于检测基因的表达，不易检测基因组DNA的基因的重排，突变和缺失。而大多数肿瘤性疾病和一些遗传变异和表型的改变与后者有关。为了解决上述问题，我们将芯片技术与荧光PCR技术相结合，设立设计一种含有大量微反应池的PCR基因芯片，以期 ...

丁香园网友yxbo21021提出： SNP的研究在当前仍然可以用入火如荼形容，一方面是各大数据库可以方便检索到几乎任何一个基因的SNP分布及其频率，另一方面SNP的功能研究有非常大的研究空间和前景，这应归于许多SNP的流行病关联研究重复性差，因此只有在功能上对其阐述才能解决根本问题。 当前SNP功能研究主要有以下几方面： 1、报告基因转染技术：这一技术主要用于研究启动子SNP对于mRNA转录效率， ...

SNP是单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism ）。一般来说它是双等位基因的，就是说一个位点，人群中大部分人是A碱基，那么还有一部分人是T碱基，一般不会是C或者G了，这是一般的规律，没有什么好解释的。举个例子，一个人是正常人他的某一条染色体一段序列是：AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA，反向肯定是一串t了，是吧？另一条染色体也是这个样子的 ...

是一篇蛋白质组学学期报告——Single Nucleotide Polymorphism内容，原文为繁体。 点击下载 ...

snp现有检测技术有主要的3大类别 1、测序 主要发现新的snp位点和比较集中的snp位点，如hla区域，但成本较高，工作量大，不适合大样本做疾病关联分析。 2、taqman探针 结果比较可靠，国外文章也大量应用，不过对于国内成本偏高，同类还有snpshot技术，abi和贝克曼都相应试剂盒。成本和成功率都比taqman要低。 3、snp芯片 国外大规模筛查疾病关联分析常用，illumina和af ...

单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP），主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。 SNP所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异，这种变异可由单个碱基的转换（ ...

对于SNP 研究，我个人的感觉是：曾经非常的“热”过，而现在，似乎有些降温。 这种降温在国内的研究领域内主要表现为：SNP研究做得非常多，甚至有些滥了，就象前面有的战友说的，随便做点PCR就可以在国内的杂志发文章了，文章太多太滥，没有多大的价值。 对于国外SNP研究领域，我认为现在也进入了理性思考期。SNP的文章还有很多，但是研究的思路和风格已经和以往不同了。记得2002- ...

用以检测T2DM的众多候选基因突变所需要的技术，既要求能够自动化、高通量进行，也要求除PCR之外，勿需进行PCR引物修饰、购买特殊试剂、检测标记信号或作其它的样品处理；而目前已有的许多DNA突变分析技术诸如单链构象多态性 (single-strand conformation polymorphism，SSCP) 、变性梯度凝胶电泳法(denaturing gradient gel electro ...

1、引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点： 1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错 ...

一 设计引物应遵循以下原则 1 、引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。 2 、引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。 3 、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。上下游引物的GC含量不能相差太大。附加序列(RT site P ...

为了对以个特定序列进行PCR做重复检测需要三个不同的区域，每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出。 一、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施： （1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。 （2）组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。 （3）用于样品处理的工具不能被用作普 ...

一、实验室网络设置 实验室网络由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心和省级流感实验室两级组成。 二、实验室条件及生物安全操作的要求 1．省级流感实验室实验条件及生物安全的操作要求 （1）实验生物安全要求：安全Ⅱ级+（BSL-2 级+）或安全Ⅲ级（BSL-3 级）。 （2）特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测、血清学检测中用到的血凝抑制实验（HI）可以在安全Ⅱ级+（BSL-2 级+ ...

反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直从事实验室动物疫病检测工作，现就应用RT-PCR实验方法过程中出现的一些常见污染问题做如下论述，仅共同行参考 ...

随着基因工程的发展，常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的克隆方法，对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。 迄今为止，国外尚未见到有关启动子克隆方法的综述性报道，国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、克隆方法和食用菌中已经分离到的启动子作过综述。而近年来又有许多改进的克隆启动子的方法获得了多方面的成功 ...