PCR技术

PCR技术在分子生物学领域的重要性自不必多说，各种新的PCR技术也不断涌现。引物的设计是进行各种PCR的重要前提条件。虽然现在有很多软件可以设计并评价引物，但在实际的PCR扩增过程中，必须对反应体系和反应条件进行优化，尤其是引物浓度，Mg2＋浓度，退火温度等。有时候无论我们如何优化，也拿不到目的产物，只能重新设计。鉴于在引物的设计和合成过程中所花费的时间、精力和财力（尤其对于新手而言），本着资源共享的原则，建立丁香 ...

这是一本有关PCR技术的新书，希望会为你的PCR试验提供帮助！上篇PCR的基本理论与技术第一章 聚合酶链式反应分子克隆(molecular cloning)、DNA测序(DNA sequencing)和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)是当今现代分子生物学的三大主流技术。在这三种技术中，PCR技术在实践中的应用日益广泛并随着分子生物学实验技术的成熟而不断的创新和拓展。早在二十世纪七十年代 ...

前一段时间在百度中搜索，发现多年前写的一个关于荧光定量PCR技术的PPT有很多人看过或引用过，考虑到自己作荧光定量PCR工作已经了五年了，做的实验以及解决的问题远比五年前多了，因此利用过年的时间，写点荧光定量PCR实验中的一些注意事项及感想，无论对错，都是希望对相关的人员有些参考价值。荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了，我就不细说了，主要是写一些有人问过的事，希望写的内容是大家都关心的。普通PCR与荧光定量 ...

最近刚开始做PCR，参考了很多与引物设计相关的帖子，结合自己使用primer5和oligo的体会，想谈谈自己设计引物的方法和步骤，恳请各位前辈指正。RT-PCR引物设计原则和方法在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence, 出现输入序 ...

园子里原来有关于这本书的帖子，采用56邮箱共享，均已失效，现在重新上传，申请版主加分：聚合酶链反应(PCR)自发明至今的20年来，经过不断的开发和改进，现在已经广泛应用在诸多领域，是分子生物学、临床诊断、法医检验等实验室的常规技术。　　本书是美国冷泉港实验室出版社PCR Primer：A Laboratory Manual第二版的影印本，是第一版的全面更新和升级。本书由从事PCR研究的专家们共同研讨和撰稿，是一部最新、最权威的PCR ...

为大家提供几个在线设计站点：(1) The Primer Generator (http :/ / www. med. jhu. edu/ medcenter/primer/ primer. cgi)( 2 ) Primers ! ( http :/ / www. williamstone. com/primers/avascript/ )(3) The GPRIME Package ( http :/ / life. anu. au/ molecular/ soft2ware/ gprime. htm)(4) WWW Genefisher ( http :/ / bobiserv. techfak. uni2biel ...

touchdown PCR即降落PCR，可以选定一个温度范围，如50——35，每个温度2循环，然后在50度15循环。其原理是，随着退火温度的降低，特异性逐步降低，但特异性条带在温度较高时已经扩增出来，其浓度远远超过非特异性条带，随着退火温度的降低，特异性条带优先被扩增。这种方法的退火温度范围较大，在不知道最佳退火温度时比较适用。http://www.espanol.pcrlinks.com/variantes/touchdo ...

qPCR方法的准确性和可重复性一直备受争议。即使同一批样品、同一个人操作，在不同的时间点，可能会获得趋势一致，但是结果不同的的qPCR data。对于定量RT-PCR来说，获得一个误差小、重复性高的定量PCR结果，关键在于以下因素：1,从组织和细胞获得原始材料时，细心程度和可重复程度；2，RNA的抽提和纯化3，RNA的反转录4，将cDNA进行定量PCR扩增5，操作者“双手”的灵巧程度事实上，即使是那些非常有经验的PCR技 ...

PCR咖啡吧咖啡者，香甘醇酸苦五味俱全，原始而又粗犷，深邃而又耐人寻味。早期“科学咖啡馆”的雏型为J.J.汤姆森在19世纪末建立的卡文迪许物理学会，科学家每天午后茶时漫谈，他们谈他们看到、听到、测试、观察到的现象和发生的事件。卢瑟福在领导这个实验室时把午后茶漫谈变成他领导的科学家们每天最重要时刻。后来传于世的剑桥风格——“在悠闲中治学”、“自由和独立的工作”便源于此。卡文迪许实验室为国际顶尖实验室，在物理、分子生物学方面 ...

Cloning of Long Genehttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=344365&sty=1&tpg=45&age=0长片段PCR的new protocolhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=350181&sty=1&tpg=43&age=0Pfu DNA polymerase的延伸时间http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67& ...

本人从事荧光定量PCR检测试剂的开发工作，用过市场上主流的多款荧光定量PCR仪，如ABI5700，ABI7700，ABI7000，ABI7300，ABI7500，MJ opticon，MJ opticon2，bio-rad ICycler，LightCycler1.5，roter-gene3000，line-gene等等。这种仪器各有各的特点，但都存在不足之处。总的来说，ABI公司的荧光定量PCR仪产品比较多，成系列，但目前而言A ...

进入丁香园，是从做MSP开始的。从对DNA甲基化的一无所知到MSP实验成功，经历了很多艰难，同时也收获得了不少经验。从丁香园的帖子可以看出，近几年来，国内对DNA甲基化的研究在逐年增加，战友们在实验中遇到的困难也不少。在这里谈一下对MSP,及BSP的一点体会，希望能对新手们有所帮助，也请老手们批评补充。亚硫酸氢盐转化和PCR扩增是MSP,BSP的两个基本步骤。亚硫酸氢盐转化，估计现在做手工修饰的也不多了，试剂盒能 ...

欢迎来到《PCR技术讨论版》：本版归属于“实验技术讨论区”，以讨论各种PCR技术和PCR相关技术为主。本版的宗旨是为您提供各种PCR的相关理论和实践经验的交流平台！欢迎您参与交流！发贴必读&加分标准： 新手朋友（0~5分），加分从优 --- 跟丁香园大政策保持一致1、欢迎介绍自己原创资源（包括原创文章、课件、ebook、技术经验、心得体会等），斑竹视情况加1～5分。2、求助或发布资源前请先用 功能在本版检索一下，或到 旧帖资源索引区检索一下（推荐 ...

一个PCR相关的专业网站，内容很全http://www.pcrlinks.com/实验方法与步骤详解http://swjsx.ntmc.edu.cn/Protocol/home.htm美国AXYgen公司http://www.axygen.com/NewFiles/pcr.htmlhttp://www.alkami.com/This 158 page PCR manual covers the following topicsPCR Primer designPCR M ...

xjktony扩增模板的GC 含量为66％,也不算很高,我做过更高的GC 含量(80%)的PCR.对于 这种高GC含量的PCR,要加些DMSO等,以解除其二级结构的影响,当然现在也有专门这种PCR Buffer卖.vanny宝生物有这种做高GC含量的酶和buffer，称为LA TAKARA酶，里面有GC buffer，效果还不错。westernblot你用DMSO5％加到里面，60％应该不是算高的，如果实在不行，就用advantage 2 high GC ...

多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术及其应用做一综述。1 实时荧光定量PCR技术的方法学1.1 原理 所谓real ...

TaqMan PCR以及ABI-7700的简单介绍------------------------------------------------ABI PRISM® 7700 Sequence Detection SystemIntegrates a PCR-based assay with laser scanning technology to excite fluorescent dyes present in the specially designed TaqMan® probes. It is a fully integrated system for real ...

一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度 ...

(一）PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质 ...

PCR引物设计的黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶 ...