PCR技术

精华内容，与EB相关： 电泳问题 电泳问题（2）EB的危害及安全问题： ask: DEPC AND EB 的英文全名 请问DEPC和EB的毒性何在 求助：EB有何危害？急！ 求救:EB大量污染的补救措施 PCR中涉及有毒物质的步骤 琼脂糖凝胶电泳的时候,EB的毒性问题 请问EB是不是多多益善啊 GoldViewTM DNA染料（溴化乙锭的替代品） MSP中的亚硫酸氢钠处理后... 实验用的EB都是怎么处理的呀EB的配制及使用： 急！向大家求助EB如何配制？ 溴化乙锭的浓度? 急问:已经有配好的0. ...

PCR的假阳性问题深受重视，但我个人认为PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格的实验室管理，合理的环境设置，以及加入UNG酶抗污染基本可以解决，而引物的非特异性问题基本属于厂家试剂质量问题。而PCR的假阴性却不同，它涉及了与PCR实验的几乎所有人员和技术环节，十分复杂。就临床而言，大三阳检出率低、甚至于GC镜下都很多时， ...

Panomics公司的QuantiGene2.0 产品是基于Branched DNA（b-DNA）技术，完成核酸水平的精确定量检测。它克服了传统的real-time PCR（或者q-PCR）技术中的种种不确定因素，无需抽提纯化RNA，无需反转录，无需PCR扩增，对样本量下限无要求（只需mRNA拷贝数在检测范围内），只需将样本用特定裂解液裂解后，经探针杂交与信号放大即可迅速得到比real-time PCR更加精确的定量结果。除细胞、组织 ...

感谢您的积极参与关于real time PCR 熔点曲线分析检测点突变real time PCR中的疑问 重组质粒的选择哪里下载rflp－pcr的protocol长片断DNA如何扩增帮忙设计引物这篇文献用的是何方法提的RNA咋回事端粒PCR为什么试验结果不能重复求助M.SssI的使用说明帮分析自行设计的引物引物设计中的疑问一步法RT-PCR和两步法RT-PCR具体有什么不同呢两种逆转录酶（AMV 和M- MLV)的 区别为什么相同的序列用 ...

如何建立一个PCR实验室？为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出.1、样品准备区这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。2）组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。3）用于样品处理的工具不能被用作普通 ...

我准备用Tagman探针做real time PCR,帮我设计一下好吗？我要设计三组，检测的是两个基因, 内参用P－actin，或GAPDH， 最好能参照你用过的内参引物探针.谢谢各位大侠快帮忙啊！急1）RNA (U50930.1:645..772, U50931.1604..1837)CDS U50930.1:712..772, U50931.1604..1749)agctcag cctccaaagg661 agccagcctc tccccagttc ctgaaatcct ...

一 设计引物应遵循以下原则：1 引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。2 引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。3 引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。上下游引物的GC含量不能相差太大。附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值时不算,但在检测互补和 ...

友情整理 11月1日～11月15日 零应助贴求助血清中提取病毒RNA进行扩增http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4774547&sty=1&tpg=20&age=0SMART RACE 高手看过来:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4774641&sty=1&tpg=20&age=0求各位帮我看看http://www.dxy.cn/bbs/post/view?b ...

PCR扩增技术，即聚合酶链式反应，是美国科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。 现在的PCR扩增不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。PCR扩增技术的基本原理PCR扩增，类似于DNA的天然复制过程，其特异性 ...

过去的几年里人群中肥胖症患者的比例急剧升高。因此对脂肪细胞---脂肪组织的基本组成单位---功能的研究也不断升温。这其中大多数的研究通过从脂肪组织中提取少量的RNA来检测参与代谢调控的低丰度基因表达水平。就小量RNA的检测而言，与传统的RNA定量检测手段（如RNA印迹分析）相比，逆转录实时定量PCR(qRT-PCR)更为灵敏。实际上，这一技术足以定量单细胞的RNA水平。qRT-PCR应用的主要限制因素是结果的高不稳定 ...

PCR的优化在PCR的优化开始阶段，应用新的DNA模板，引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法，其扩增效果一般总不是最佳的。这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和（或）增加目的DNA产物的产率。表1列举了一些通常遇到的问题和对PCR反应进行优化的一些推荐方法。表1 PCR扩增的疑难解析问题解释补救措施目的产物条带在两种阳性对照管与试验管内部呈现明显的非常模糊的带型。目的产物条带有时呈不清晰的成片 ...

准备做Real time-PCR,目的基因序列（cDNA)和引物见下（PP5.0设计）我用Blast分析了一下，可是出来的结果不太懂，有哪位大虾解释一下及给出建议。谢谢！BLAST地址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Blast.cgi结果：见附图上游：CTCTGGCTGACTTGGCTTGG下游：GATTTGGTTGCTCTGTTGACTC原cDNA序列：atgaccgcgc ggggcgcc ...

每次拿到生工的合成报告单，就要计算引物的溶解体积。所以写了个网页，可以做一个简单的计算，希望能用得上：其中分子量和OD值按合成报告单来；引物浓度按自己的需要来；其他两项自动计算出结果。代码：function Calc(){if(Primer.InputMW.value!=0){Primer.OutputMol.value=Primer.OD.valuundefined33/Primer.InputMW.value;Primer.Volu.val ...

文章题目：Consensus-degenerate hybrid oligonucleotide primers for amplification of distantly-related sequencesNucleic Acids Research, 1998 Apr 1; 26(7):1628-1635.设计兼并引物的方法很多，但你听说过如何降低兼并度，以及如何提高成功率的方法吗？CODEHOP方法肯定是一篇这方面的精典文章！推荐出来，与大家共享！摘要：We de ...

Multiplex PCR-based reverse line blot hybridization assay (mPCR/RLB)—a practical epidemiological and diagnostic tool.Sequence-specific amplification polymorphisms (SSAPs): a multi-locus approach for analyzing transposon insertions.Single nucleotide poly ...

我做大鼠心肌的醛固酮合酶RT－PCR，都2个月了，一点结果都没有，偶尔出一条带还不是我所需要的条带，最近有人看了我的基因序列发现局部GC 含量高，建议用la Taq,就又花了300多元反复作了多次还是没有结果，用脑及肾上腺的cDNA作阳性对照也同样，而用同样的cDNA能扩出其他4对目的基因。真郁闷啊，快过年了，老板说节前做不出来节后先上班，业余时间作试验，一定要做出来。看来春节过不好了！那位高手能指点迷津,在下多谢了。我的 ...

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PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...

Applied Biosystems Veriti™ 96-Well Thermal Cycler,Veriti™ Thermal Cycler 技术特点如下：Block Format 0.2 mL AlloyFeatures Standard 0.2 mL format and sample block. Enabled to run FAST chemistry,Max Block Ramp Rate 3.9 ºC/SecMax Sample Ramp Rate 3.35 ºC/SecEnabled to run FAST Chemistry YesTemp ...

查了一些发现在本版还是有一些免疫组化方面的求助的，而其他版又没有旧帖整理这个分版，所以发在这里，望主任理解。1。免疫组化的原理http://www.dxy.cn/bbs/thread/856955http://www.dxy.cn/bbs/thread/1008921http://www.dxy.cn/bbs/thread/10119982。免疫组化的步骤http://www.dxy.cn/bbs/thread/1045385http: ...