PCR技术

我进实验室后做的以一个实验就是PCR，书上说PCR极易污染，推荐实验过程中要戴口罩帽子手套，要为PCR开辟一个专区等等。受了这样的教诲，我做实验时当然一点都不马虎，每次PCR都做阴性对照和阳性对照，从来都没有污染过，后来渐渐就对书上说的那一套不以为然了，心里说：我在阴性对照里面吐点口水，看你有没有条带出来（不过没有真这么干过呵呵）。后来我做PcR就不再作对照了。在后续的构建重组质粒和测序中也没有出现什么问题。我越 ...

定 量 PCR 技 术 简 介聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）是微量核酸扩增的有效工具，由于其灵敏、特异、快速等优点，在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展，特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面，不仅需要检测其存在是否；而且还需要得知扩增前标本中的模板的数量，因而必须对PCR进行定量检测，即定量PCR技术，本文将对定量PCR的定量原理、技术 ...

聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)　 聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年来发展起来的一种基因分析方法。　PCR-SSCP分析的基本程序为：首先PCR扩增特定靶序列，然后将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含变性剂的中性聚丙烯酰 ...

1.多重PCR的相关文章以及原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2077150_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=7917287&sty=1&tpg=1&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4532991&sty=3&keywords=%B6%E0%D6%D8PCRhttp:// ...

标 题: PCR实用技巧从同学那里copy的，与大家共享：增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是G ...

1．SYBR Green I：一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。2．Taqman探针：也称为水解寡核苷酸探针。该探针在5’端标记报告荧光基团，在3’端标记淬灭荧光基团，在探针完整时报告荧光基团发出的荧光被淬灭荧光基 ...

因特网上分子生物学的免费软件作者：pfdbs对研究分子生物学的人来说，因特网是一个大宝藏。因特网上有大量的分子生物学免费软件与各种蛋白质、核酸和酶的数据库，应用它们，可以极大地推动我们的研究工作。　　因特网上的免费工具软件有在线与离线两种形式。对于在线工具软件，只要通过浏览器，输入一定的信息，便可得到相应结果，例如二级序列分析、PCR引物设计等信息。而离线工具软件，只要下载了这个软件，便可在本地*上使用。当你在互联网上 ...

虽然长了些, 但耐心看完,应该对你的问题有所帮助各位战友 我们来聊聊PCR ：）PCR可以说是目前分子生物学实验中应用最为广泛的一种技术。从最初的在几个水浴锅里把试管放来放去，到现在各种先进的PCR仪， 到REAL TIME PCR。 设备是越来越先进，方法是越来越多，但基本的原理还是那套。然而实际操作中，仍然有很多的问题让人头疼。正好看到有人建议来个PCR讨论区，就信手来了这么一篇，希望能抛砖引玉 顺手牵羊 大海捞针 针锋相对 对对对 对不上来了.PCR的 ...

要进行RT-PCR的序列就是 Oryctolagus cuniculus glucocorticoid receptor1 atggactcca aagaatcatt aagtcccccg ggtagagagg aggtccccag cagtgtgctc61 aggccggcgg agcgcgggaa tgtgatggac ttgtacaaaa ccctaagggg aggagctcct121 gtgagggtgc ctgcatcttc tccctcactg gctcctgc ...

本人刚进实验室，目前在做实验前的准备工作，在引物设计遇到一些困难，希望各位战友能帮帮忙！我的序列如下，为双链RNA病毒，准备做克隆表达。1 gttaaaaatc tatagagatg gacactatcg ccgcaagagc actcactgtg atgcgagcat61 gtgctacgct tcaagaggca agaattgtgt tggaagccaa tgtgatggaa attttgggga121 tagctatcaa taggtacaat ggac ...

这份资料以言简意赅的幻灯形式展示了PCR从引物设计到反应条件的优化应注意的问题，相信对您的实验有指导意义。极力推荐！http://www.biotechlab.nwu.edu/pe/包括以下内容：Introduction - PCR PrimerComponentsPrimer DesignPrimer Design - IPrimer Design - IIMelting Temperature, TmTm Calculations, Nearest Neighbor A ...

厦门大学第四届荧光PCR─基础与应用研习班（2010年11月14日-11月20日，厦门大学分子诊断教育部工程研究中心）实时荧光PCR以特异性强、灵敏度高、定量准确、全封闭等优点，已成为基础生物学研究的重要平台技术，正成为临床诊断新一代标准技术，广泛应用于传染病、遗传病、肿瘤等领域。为使广大一线工作人员全面掌握该技术，同时熟悉该领域的最新进展，厦门大学分子诊断教育部工程研究中心在2004、2006、2008年成功举办 ...

“实时荧光定量PCR仪原理及仪器操作实训班”第一论通知实时荧光定量PCR技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已广泛应用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。为了充分提高荧光定量PCR仪的使用效率，提高广大使用者的试验成功率，我们将于10月23-24日举办《荧光定量PCR仪原理及仪器操作》实训班。培 ...

PCR片段拼接的SOE和SDL方法PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操作繁杂，而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两种基因 拼接的新方法，即SOE和SDL法，就能巧妙地解决这个问题。SOE法1989年，Hor ...

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1.当PCR结果不满意时,考虑以下几个方面:(1)将PCR反应的试管与反应板紧贴,(2)使用50ul或更少反应体系时,勿使用AmpliWax,两个反应混合液=的操作方式在大多数情况下很有效,(3)当酶反应混合物以70度"热启动"开始循环时,切记在加入酶后稍微振荡一下,因为在0.2ml的PCR管不能均匀传热.(4)不要随意减少dNTP的用量,必需与其他成分保持平衡.2.没有扩增产物:(1)在提供氯化镁缓冲液中,以0.25mmol ...

有价值但无法归入其他话题，就先单独放在这里吧。full sequence of pGEX-4T-1http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=323868&sty=1&tpg=48&age=0如何测等位和单倍型基因频率http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=636538&sty=1&tpg=7&age=0确诊丙肝http://www.dxy.cn/bbs/post/view ...

RT-PCR实验方法总结大全RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2RT按要求做，一般不会出太大问题。?3PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法 ...

各位站友：我于2002年开始进行一系列的SNP，人细胞因子RT-PCR检测和核因子-kappa B的EMSA检测，积累了一些资料和引物，目前仍在继续进行该类的研究。如有需要者可与我联系，我将随时赠送给真正需要者，并在赠送前都进行验证以确保引物能P出东东来。我的EMAIL：yubaojun1219@sohu.com以下是我的研究结果和资料。请大家批评指正。基因组DNA的提取：静脉全血2ml加0.5ml ACD(柠檬酸22.8 mM ...

1。引物二聚体形成的原理：http://www.dxy.cn/bbs/thread/5251134http://www.dxy.cn/bbs/thread/52543942。怎样区分引物二聚体http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/553209_0.html3。引物二聚体在什么情况下需要注意http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/553338_0.h ...