RNA实验技术

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目前RNAi技术已经进入了生物科学研究的许多领域，成为了一种主要的生物学研究工具，发展得相当迅速，并受到了此次诺贝尔奖评审委员会的青睐，获得2006年诺贝尔奖医学/生理奖。然而这一才历经十个年头的技术依然对于许多研究人员来说还是很陌生的，以下是有关 i技术在哺乳动物细胞中应用的具体设计策略，主要来自于《遗传》杂志2005年“ 干涉（i）技术应用于哺乳动物细胞的研究策略”，希 ...

为了获得全长的cDNA 5’及3’末端序列，许多研究人员使用了称之为cDNA末端快速扩增，或RACE的方法。传统的RACE方法得到的PCR产物含有全长及断裂的cDNA产物。GeneRacer™试剂盒确保您只得到含有全长cDNA末端的完整序列，是您得到更高效的结果并节省您的时间 GeneRacer™的优点 确定一个基因的全长序列对于研究异源转录起 ...

体外制备 1.化学合成 许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。 最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况下，需要大量siRNA进行研究 不适用于：筛选siRNA等长时间的研究，主要原因 ...

1.RNAi： 近年来的研究表明一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。 2.siRNA： siRNA（small interfering RNAs）是一种短片断双链RNA分子，能够以同 ...

RNA for S1 or PE analysis must be free of chromosomal DNA. This can be accomplished by extraction of the RNA with hot phenol but phenol can especially if its pH is acidic cause the specific loss ...

3' Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE) PCR This technique is used to obtain the 3'end of a cDNA it requires some sequence information internal to the mRNA under study. The sequence information obt ...

Restriction Map and Cloning Site of the RNAi-Ready pSIREN-DNR Vector. Unique restriction sites are in bold. RNAi-Ready pSIREN-DNR is pr ...

AMES/Chloroform extraction in our lab to extract total from potato leaves for viroid analysis. The protocol is as follows: AMES Buffer (for 200mL): 11.7g NaCl 160 mL dH2O &nbs ...

The following protocol is for MEGAscript II Kit (Ambion). 1. PCR amplify the DNA template. The 5'-end of the template should contain the minimum promoter sequenences of T7 or Sp6 or T3. A 5-primer wi ...

Background Information of RNA i RNA interference (RNA i) is a biological process in which the introduction of double-stranded RNA (dsRNA ) into a cell results in targeted post-tranional gene silencing ...

Transcription of cRNA probe Reagents/Solutions DNA (PCR or plasmid) with bacteriophage RNA polymerase promoter in suitable orientation (see note 1 ) ~1µg/µl in TE buffer 10mM MgCl2 5x Tr ...

Note: Start with 20 mg of total RNA for each labeling reaction. All solutions that can be filtered should be filtered. Cy dyes are light sensitive and should ALWAYS be handled in dim light. RNA ...

All solutions used in RNA preparation should be treated with DEPC as follows: add DEPC as follows: add DEPC to 0.1% and vigorously stir for one hour to O/N followed by autoclaving for 30 minutes ...

A．普通阴性对照 1.siRNA实验应该有阴性对照； 2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照； 3．Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性； 4．阴性对照需要确定和目的靶细胞中其它基因同源性很低。 B．荧光标记阴性对照 1. RNAi negative control与哺乳动物基因无同源 ...

RNAi相关文章（for free） Prospects of RNA interference therapy for cancer S IPai Y-YLin BMacaes AMeneshian C-FHung and T-CWu Gene Ther 13: 464-477; ...

Post-transcriptional gene silencing (PTGS) which was initially considered a bizarre phenomenon limited to petunias and a few other plant species is now one of the hottest topics in molecular biology ( ...

Reagents and Equipments TRIzol Reagent (Life Technologies cat# 15596-026) or TRI reagent (Sigma cat # T-9424) DEPC (RNase free) water or 0.5% SDS solution in DEPC treated water Chloroform (Fishe ...

RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明，RNA在生命的进程中扮演的角色远比RNA我们早前设想的更为重要。RNA干扰（RNA interference）的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识，更因为可以简化替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具，因此格外引人注意，在2002年度Science评选的10大科 ...

The ribonuclease protection assay (RPA) is a highly sensitive and specific method for the detection of mRNA species. The assay was made possible by the discovery and characterization of DNA-dependant ...