RNA实验技术

RNA 酶污染是全体从事 RNA 相关实验的人员的头号公敌。即使是100度高温或者是高压灭菌也不能完全灭活无孔不入的 RNases 。因而相关的实验中往往要用到RNA 酶抑制剂。最常用的 RNA 酶抑制剂 Human Placental ribonuclease inhibitor （ HPRI ）是一种蛋白质，可与多种 RNA 酶（包括 RNases A B C 类）非共价结合成为等摩尔复合物， ...

The RNA in situ procedure described below is based on the protocol developed by Tautz and Pfeifle (Chromosoma 98 (1989) p81) but adapted to allow the screening of 96 RNA probes on whole-mount Drosophi ...

真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7 G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+ ）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。 mRNA的 ...

Polymerase III in vitro Transcription Steve Hahn For the following reactions use appropriate shielding and dispose of radioactive waste properly! A 20 microliter transcription reaction contains: 4.0 ...

第一节 概 述 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA，通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链，将双链cDNA和载体连接，然后转化扩增， 即可获得cDNA文库，构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。自70年代中叶首例cDNA克 ...

1) Harvest 1x105 to 108 cells. Wash 1x w/PBS and freeze in liquid N2 and store @ -70℃ 2) Resuspend each pellet in 1.5ml lysis buffer (300μl 5x Lysis 75μl 200mM VR 1.125ml H2 O 3) Incubate on ic ...

Primer Extension analysis of total yeast RNA 1. Mix the following in a 1.5 ml eppendorf tube: a. 20-80 micrograms yeast RNA dissolved in H2O (the amount will depend on the level of expression for the ...

RNA沉默是广泛存在于生物中的一种古老现象，是生物抵抗异常DNA的一种保护机制同时在生物生长发育过程中扮演着基因表达调控的角色。文章对RNA沉默研究中的几个热点问题进行了介绍，按RNA沉默持续时间的不同对其在植物中应用的方法进行了分析，并重点论述了RNA沉默在植物功能基因组研究、作物品质改良以及抗病毒植物培育等方面的应用及其发展前景。 RNA沉默(RNAsilencing)是一种结合和降解特异mR ...

A novel approach for evaluating the efficiency of siRNAs on protein levels in cultured cells. Wu W Hodges E Redelius J Hoog C. Nucleic Acids Res. 2004 Jan 22;32(2):E17. Center for Genomics and Bioinf ...

How does RNAi work? Genetic and biochemical data indicate a possible two-step mechanism for RNA interference (RNAi): an initiation step and an effector step. a | In the first step input double-strande ...

Prior to Extractions ・ Bake all necessary glassware metal spatulas mortars and pestles overnight in a 200°C oven after wrapping them in aluminum foil. For each sample you should minima ...

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(doublestrandsRNA，dsRNA)引起的，广泛存在于动物植物中的序列特异性转录后基因沉默过程，是生物体在进化过程中，抵御病毒感染及由于重复序列和突变引起基因组不稳定性的保护机制。Elbashir等发现，一种称为短干扰或小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)的RNA干扰中间体，能在果蝇中导致mRNA的降解。这种iRNA为2 ...

siRNA Design RNAi target selection rules : Targeted regions on the cDNA sequence of a targeted gene should be located 50-100 nt downstream of the start codon (ATG). Search for sequence motif AA ...

In vitro transcription with yeast nuclear extract Steve Hahn Last Modified Fri Apr 25 2003 Wear gloves throughout use RNAse free solutions (either autoclaved or sterile filtered) and clean bench and ...

000" height="300" width="500" classid="clsid:D27CDB6E-AE6D-11cf-96B8-444553540000" How does RNAi work? Genetic and biochemical data indicate a possible two-step mechanism for RNA i ...

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1． 希望软件可以在 web 上使用。 即用户可以访问我们的网站， 输入基因代码， 即可自行在网上设计 siRNA Oligo 。 2． 可参照的软件形式： 见如下网站： www.dharmacon.com www.ambion.com www.qiagen.com 3． 希望能就每一个所指定的基因找到至少四对以上可合成的双 ...

We use the Promega Ribomax Large Scale RNA Production System T7 (Cat. No.: P1300) to produce dsRNAs and the RNAi Exp.html" target=_blank> Jack Dixon protocol ( RNAi _Dixon.html" target=_b ...

Using siRNA for gene silencing is a rapidly evolving tool in molecular biology. There are several methods for preparing siRNA such as chemical synthesis in vitro transcription siRNA expression vectors ...

越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNA interference pathway）。RNAi的应用包括功能基因组学，药物靶筛选，细胞信号传导通路分析等等。 目前为止较为常用的5 ...