RNA实验技术

1. Add the following to a sterile microfuge tube on ice: -1 ug linearized plasmid DNA. -2 ul Dig RNA Labeling Mix 10X concentrate -2 ul 10X transcription buffer -1-2 ul RNase inhibitor (DNase free) -a ...

Rnai 最近由于RNA 干扰（RNA interference，RNA i）的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的（1），是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNA i领域取得的进步，已经有许多这方面的综述发表（2-4）。RNA 干扰是由长的双链RNA 分子发动的，该分子可以被Dicer enzyme加工成长度为21-23个核苷酸的RNA （ ...

The protocols listed here are for Drosophila cells in 6 well plates and our pre-aliquoted 384 well plates. RNAi experiments may be done in other size plates just scale up or down. Adopted from Clemens ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f7f7"; alimama_linkcolor="552c55"; ...

Diethyl pyrocarbonate derivitizes histidine residues and is therefore an effective method to inactivate nucleases including RNAse. CAUTION: DEPC is irritating to the eyes skin and mucous membranes. It ...

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Northern Blot Preparation of Formaldehyde Agarose Gel The gel conditions (1% agarose 1X MOPS 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electrophoresis. If longer times are necessary the formald ...

第二节 动植物组织mRNA 提取 一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 1、无RNA 酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装 ...

Overview We design shRNA molecules with an algorithm. Our algorithm uses several criteria to rank potential 21mer targets within each human and mouse Refseq transcript. The algorithm applies a set of ...

RNA干扰是最近发现的一种功能工具。当RNA导入一个细胞时，最终会引起细胞内互补mRNA的降解，从而导致基因功能活性的阻断。 PTGS转录后基因沉默（posttranscriptionalgenesilencing）；一种首先在植物中确定，然后发现在动物中也存在的现象。尽管PTGS最初被描述作一种病毒防御和转位子沉默的内源方法，现在它已经成为一种新的令人激动的研究工具��RNAi干扰。 协同抑制（ ...

一、用异硫氰酸胍提取 提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）： 1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管。 2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀。 3.13000rpm离心15min。 4.在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul -20度预冷的异丙醇。 5.取第3 ...

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RNA interference (RNAi ) by double stranded RNA (dsRNAs) molecules of approximately 20-25 nucleotides termed short interfering (siRNAs) is a powerful method for preventing the expression of a particul ...

First strand of cDNA synthsis 1.Add 2 μl of Not I primer-adapter to a sterile 1.5 ml RNAase free tube add 4.5 μl mRNA of molt4 cells (~5.2 ug) add 0.5 μl DEPC-H2O. 2. Heat the mixture at 70℃ ...

一．原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分，也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制，已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究，首先要获得该性状基因，从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关重要的，如Northern印迹及杂交分析、cDNA合成等实验的成效在很大程度上取决于RNA的质量。利用提取 ...

RNA酶保护试验(RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1． 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使灵敏度下降，而RPA将所有杂交体系进行电泳，故损失小，提高了灵敏度。 ...

TRIzol method for RNA isolation -To tissue or cells add 200- 1 ml TRIzol (GIBCO BRL) 1.homogenize for 60 sec (vortex or polytron) 2.add 40ul-200 ml chloroform (1/5 volume of Trizol) 3.mix by vortexing ...

The use of small interfering RNAs (siRNAs) to induce targeted gene silencing in mammalian cells offers researchers a powerful tool for analyzing gene function. Ideally one would like to work with indi ...

在活体RNAi关键点：类似药物属性的引入，如稳定性、细胞内的传送、组织的生物可溶性进入合成的siRNA。