RNA实验技术

Electrophoresis through agarose or polyacrylamide gels is the standard way to separate identify and purify nucleic acid fragments. The location of the nucleic acid within the gel can be determined by ...

一、实验目的 掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。 二、实验原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。 三、实验材料 ...

总 RNA 的电泳检测，原来我使用 Lambda DNA/EcoR I （或者 Hind III）酶切 Marker，现在基本上不再用 Marker 了。指示剂一定是溴酚蓝加二甲苯氰，胶浓度 1-1.2%。加样后，开始电泳 (电压的选择的唯一依据是，我后面的时间安排。)。 溴酚蓝出孔 2-3cm 后终止电泳，紫外观察。首先能吸引我的一定是非常亮的位置(是否上样过量)，然后观察溴酚蓝到二甲苯氰之间的 ...

人、小鼠和大鼠的多种组织来源的高质量mRNA经电泳分离后预转于尼龙膜上 .预制的即用型Northern杂交膜，免去RNA电泳操作过程 .可检测范围：0.5-10kb .可重复使用 .提供ExpressHybTM快速杂交液样品 .可靠的优良品质 从1991年始，公司就向广大的生命科学研究者提供高质量的预制杂交膜。而MTN™膜更是在国际著名的学术期刊上有将近3000篇文献引用。 严谨的制作 ...

AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array) 同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析 同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析 检测关键基因在细胞关键功能中的角色 只需简单的杂交步骤 就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开展。但两年前(1997)，随着Clontech公司推出AtlasTM cDNA矩阵，情况大 ...

High-throughput protein analysis integrating bioinformatics and experimental assays. Nucleic Acids Res. 2004 Feb 3;32(2):742-8 The wealth of transcript information that has been made publicly availa ...

Many ...

一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示 ...

从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA 。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。 从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般 ...

第一部分 Total RNA 的提取 一、 试剂配制 准备工作： 1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部，置于烤箱内180℃，烤6小时。 2、50ml/1.5ml离心管、枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后，121℃ 20mins 高压灭菌。 3、电泳槽及电泳托、梳子 ...

第三节 植物病毒RNA 提取 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液（10mg/ml）。 二、设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA 酶的 ...

一、目的： 学习稀碱法提RNA的原理与技术。 二、原理： 由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和 ...

Overview With this protocol transcripts that were initiated from specific genes by RNA polymerases prior to permeabilization can be measured. Instead of a nuclear extract permeabi ...

基因敲除和转基因动物是功能缺失表型研究的主要方法。然而，获得这些动物是一个漫长而且费用昂贵的过程，同时很多基因的缺失会导致胚胎致死表型，使得基因敲除变得不再可能。 灭活蛋白功能的方法包括结构域阴性突变构建和分析，和使用抗体和aptamers。但是，这可能需要花费一些时间确定什么构型和结构有功能，而且它们似乎只对某些靶标有作用。 有两种方法被用来调节mRNA的更新，反义mRNA和核酶（ribozym ...

In vitro transcription with yeast nuclear extract Steve Hahn Wear gloves throughout use RNAse free solutions (either autoclaved or sterile filtered) and clean bench and pipetmen with 95% ethanol befo ...

为了分析特异siRNA 序列在基因活性上的效应，必须知道导入siRNA 的序列。这将要求设计合成寡核苷酸或者载体上的短的发夹RNA （siRNA ）序列，转染后检测基因的阻断。而dicer酶切的siRNA （d-siRNA ）导入细胞后，由于d-siRNA 库中通常都有好几种有效的siRNA 序列，它们在起始RNA i反应尤其有效。 然而目前还没有方法确定在这个库中起作用的特异的序列。 ...

Polymerase III in vitro Transcription Steve Hahn last modified 10/15/99 For the following reactions use appropriate shielding and dispose of radioactive waste properly! A 20 microliter transcription r ...

与rRNA 和tRNA 不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA 在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA 中分离mRNA dmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA 模板。 进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA 相比，采用poly(A)+ RN ...

RNA extraction buffer: 0.1M NaCl 2% SDS 50mM Tris/HCl (pH9) 10mM EDTA 20mM ß-mercaptoethanol 1. Grind leaf tissue on liquid N in mortar and pestle. 2. Transfer the ground tissue to a 10ml conica ...

siRNA Database Searchable database of Silencer ™ Validated and Pre-designed siRNAs to >34000 human mouse and rat targets. All siRNAs in the database have been designed for maximum potency an ...