RNA实验技术

RNA 提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。在有EB 存在时，完整未降解的RNA制品电泳图谱应可清晰看到18S rRNA、28S rRNA 两条带，也应当能看到一条由tRNA、5.8SrRNA 和5S rRNA 组成的、较模糊迁移较快的条带，且28S rRNA 条带亮度应为18S rRNA的1.5-2 倍。

Western Blot 印迹法是把通过电泳分离的蛋白质组分从凝胶转移至一种固相支持物，通过抗体与附着于固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生特异性反应进行检测。Western Blot 既可以定性，又可以半定量，是初步鉴定靶蛋白表达的最方便也是最通用的方法。

实时荧光定量PCR（Real Time PCR，qRT-PCR）避免了传统PCR 以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。与常规PCR 相比，实时荧光定量PCR 具有特异性更强、有效解决PCR 污染问题、自动化程度高等特点，已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA 表达量的变化；比较不同组织的mRNA 表达差异；验证基因芯片，siRNA 干扰的实验结果。它涉及到DNA或RNA 样品制备，反转录及PCR 反应等一系列重要的分子生物学过程。

将制备好的siRNA、siRNA 表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：磷酸钙共沉淀；电穿孔法；DEAE-葡聚糖和polybrene；机械法；阳离子脂质体试剂。目前用的最多的是阳离子脂质体法。

本文介绍腺病毒、慢病毒载体、逆转录病毒、腺相关病毒4种病毒包装siRNA的优缺点、原理和包装实验流程。

化学合成的siRNA 与生物合成siRNA 相比，有以下优点：操作简便，研究人员得到合成好的siRNA 后，进行简单的稀释处理即可实验：转染效率高，相对于分子量较大的DNA 质粒，其转染效率高；对细胞的或者组织的毒副作用小……

RNA 干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链RNA (double-strandedRNA，dsRNA) 引发的转录后基因静默机制。其原理是：RNaseIII 核酶家族的Dicer，与双链RNA 结合，将其剪切成21 - 25nt 及3'端突出的小干扰RNA (small interfering RNA，siRNA)，随后siRNA 与RNA诱导沉默复合物 (RNA - induced silencing complex，RISC) 结合，解旋成单链，活化的RISC受已成单链的siRNA 引导，序列特异性地结合在靶mRNA 上并将其切断，引发靶mRNA 的特异性分解，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。

mRNA的功能

RNA抽提方法

Northern blot实验步骤

AllPrep DNA/RNA 96 Kit以96孔板方式，从同一个细胞或组织样本中同时纯化基因组 DNA和总RNA。

Allison C. Mallory Bartel Lab Whitehead Institute

非常棒的动画制作效果，让你对于Nouthern Blot技术一目了然。

Bartel Lab Whitehead Institute的Allison C. Mallory总结的拟南芥、烟草总RNA提取方法简洁明了

这里介绍了组织RNA的提取方法、Northern杂交步骤、相关试剂的配制说明，内容详尽，易于操作。

Introduction The assessment of RNA integrity and purity is an important first step to many gene expression analysis applications. It is preferable to use high-quality intact RNA as a starting point fo ...

RNA Marker ( RL1000; RL6000; RL10000) 可以进行一般琼脂糖凝胶电泳和变性琼脂糖凝胶电泳。 以RL10000为例，具体使用方法如下： 普通琼脂糖凝胶电泳时 1.按下列组份配置RNA Marker样品。 2.均匀混合后65℃加热10分钟，迅速冷却至室温（最好用PCR仪)。 3.使用高质量的琼脂糖，用1×TAE Buffer制备3%凝胶，制胶时凝胶中请 ...

Northern Blot Preparation of Formaldehyde Agarose Gel The gel conditions (1% agarose 1X MOPS 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electrophoresis. If longer times are necessary the formalde ...

We found that both formaldehyde and glyoxal gels work very well for electrophoresis of RNA; we only prefer glyoxal gels because the fumes from the formaldehyde gels are unpleasant. Most protocols sugg ...

实验基本原理 RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。 判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带，且28s rRNA的亮度应为18s rRNA ...