RNA实验技术

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一、实验原理 The E.Z.N.A. HP Total RNA Kit uses the reversible binding properties of HiBind matrix a new silica-based material. This is combined with the speed of mini-column spin technology. A specificall ...

原理 拟南芥作为高等植物的模式生物被全世界的植物生物学实验室广泛研究。然而，照顾好这种小植物可能不是那么容易。这里介绍一个马里兰大学帕克学院的HevenSze实验室的通用指南。Sze实验室及其他实验室的成员为建立这个在实验室培育拟南芥的通用指南做出了许多努力。 步骤 1. 准备种植用土 我们使用Miracle-Gro混合土（2立 ...

微小RNA（microRNA，简称miRNA）是生物体内源长度约为20~23个核苷酸的非编码小RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。在近期的《细胞》杂志上，两个研究小组的成员发现了miRNAs与靶mRNA之间的新关系：他们提出miRNAs将靶基因mRNA的水平调整到了一种最佳水平，并用不同的实验进行了证明。 在第一篇 ...

自荷兰癌症研究院（The Netherlands Cancer Institute）肿瘤生物学部、德国马克斯·普朗克生物物理化学研究院（Max-Planck-Institute for Biophysical Chemistry）、丹麦哥本哈根大学等多国研究人员组成的研究团队，发现了一种进化上保守的RNA结合蛋 ...

微小RNA (microRNA，简称miRNA)是生物体内源长度约为20~23个核苷酸的非编码小RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。到目前为止，已报道有几千种miRNA存在于动物、植物、真菌等多细胞真核生物中，进化上高度保守。 一般而言，编码miRNAs的基因最初产生一个长的pri-RNA分子，这种初期分子还必须被剪切成约70 ...

一、基本原理 是指运用寡核苷酸等探针检测细胞和组织的RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知RNA核苷酸片段，近核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合（杂交），所形成的杂交体经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的Mrna、rRNA 和tRNA分子。 RNA原位杂交不同于DNA原位杂交主要有： （1）使用的 ...

RNA探针是指带有标记的能与组织内相对应的核苷酸序列互补结合的一段单链cDNA或cRNA分子。根据在RNA杂交中所使用的探针依其来源可分为三种：即特异性cDNA，cRNA探针和人工合成寡核苷酸探针。 1. 单链cDNA探针： 由于cDNA中不存在内含子及其它高度重复序列，又克服了双链cDNA探针在杂交反应中两条链之间复性的缺点，从而提高了杂交反应的敏感性。但由于单链cDNA探针的制 ...

近年来的研究表明一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达诱使细胞表现出特定基因缺失的表型 称为RNA干扰（RNA interferenceRNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子能够以序列同源互补的mRNA为靶目标降解特定的mRNA.RNAi的发现具有划时代的意义它不仅深入揭示 了细胞内基 ...

这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解细胞的方法（在SDS存在的条件下用蛋白酶K消化）去消化组织速度很慢，导致内源性RNA酶在被蛋白酶K消化或被抑制剂灭活前有时间发挥作用。原方案中（Faval ...

为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项，只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。 实验程序 RNA 酶 ...

与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。 进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA相比，采用poly(A) ...

早期的文章介绍了如何提取土壤DNA。大篇幅详细讲解了影响DNA得率和纯度的研磨均质、化学试剂（重点是裂解缓冲液）等问题。做DNA远没有做RNA压力大。不用太担心降解，得率还挺高。RNA就不一样，提取土壤RNA是环境分子生物学研究最难的研究方法之一。RNA提取本身就是件艰巨的任务，提取土壤的RNA挑战更大。最大的困难之一是土壤RNA得率。从土壤中获得RNA远比DNA少，前者 ...

一、RNAi的分子机制 通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的 ...

在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度mRNA，以及原位杂交的核酸定位检测等应用，RNA探针是一种理想选择。RNA探针同样也适用于Southe ...

在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度mRNA，以及原位杂交的核酸定位检测等应用，RNA探针是一种理想选择。RNA探针同样也适用于Southern blots，文库筛选，斑点杂交等应用。但是，在RNA探针制备过程和整个杂交实验过程中，必须注意RNAse的防污染操作。