RNA实验技术

1、纤维组织：心脏/骨骼肌等纤维组织提取RNA的关键在于彻底破碎组织。这些组织细胞密度低，单位重量的组织RNA的含量就少，建议用尽可能多的起始量。使用TRNzol法可以提取纤维组织终RNA，由于纤维组织终RNA含量较少，可按照增加的起始量成比例增加TRNzol的用量，并在液氮中将组织彻底磨碎，同时适当减少溶解RNA的溶液体积。2、蛋白/脂肪含量高的组织：动物的脑和某些特殊的植物组织中，脂肪或者蛋白 ...

2013-08-19

EB替代品总结

前不久一个网友问到我这个问题，自己了解的也少，因此这几天找了找，现在把自己找到的一些东西贴下来供大家参考。以下是师兄前辈们总结的几种EB替代品：sybr-green---- 不稳定，易降解goldview ----宣称无毒不灵敏回收连接不好荧光易猝灭gelred ---- 低毒效果很强!但价格昂贵~~genefinder ---- 效果一般，以前怀疑它是sybr green，不过有人辟谣了，所以毒 ...

2013-08-19

trizol法提取血中的RNA，怎样做量会更多？

问：trizol法提取血中的RNA，怎样做量会更多？提完RNA加DEPC水后放-80度也会容易讲解吗？答：1 血要新鲜。如果是冻存的，在解冻时要完全，之后再加Trizol。2 可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷，混匀再去离心。可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。3 每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止降解4 异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小 ...

2013-08-19

Trizol改良方法总结

1.何首乌富含多糖多酚等次生代谢物①200mg新鲜叶组织置于预冷研钵中，+聚乙烯吡咯烷酮粉(PVP)，液氮中研磨成粉②移入EP管中，+提取液（1ml Trizol +1%β-巯基乙醇+1% PVP），充分混匀，置于冰上③每管+150μL无水乙醇+100μL 5mol/L的KAc（pH 4.8），混匀后缓缓+200μL氯仿/异戊醇（24:1），冰上静置10mi ...

2013-08-19

油菜RNA的提取方法

1.取新鲜植物叶片0.1g(研磨样品前可用水或酒精清洗样品)于2mL离心管中，在液氮或-80℃下贮存。2.研磨：在样品研磨前，提取液于80℃浴预热，加入前，提取混合液上下颠倒混匀。3.提取：（1）加入500µL80 提取液，30s涡流混匀；（2）加入250µL氯仿︰异戊醇（24︰1），30s涡流混匀；（3）置于冰上。4.沉淀：（1）离心：12000rpm，4℃，5min。（2） ...

2013-08-19

血液RNA提取方法比较

土壤（污泥）RNA提取的难题和解决方法从土壤（污泥）中提取微生物的RNA是一件很困难的事情，因为土壤中的微生物不可能像培养的微生物那么丰富，二者土壤中的腐殖酸的残留会影响下游的实验，三者是提取RNA的共同难题，就是非常容易降解！目前国际上一般的试剂盒通常采用玻璃珠（钢珠）破碎的方法，然后用玻璃奶和吸附柱反复漂洗去除杂质和腐殖酸，操作过程及其复杂，一般需要2.5小时以上的操作时间，首次使用可能要超过 ...

2013-08-19

组织mRNA提取方法

（一）总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所 ...

2013-08-19

RNA提取时的一些常见问题分析

一、用Trizol 抽提的RNA，用琼脂糖凝胶电泳，出现许多条带(至少四条以上)，是哪些原因导致的？参考见解：1、是从组织里抽的还是细胞抽的？组织的RNA电泳不理想，但目的条带仍能跑出来。细胞的电泳相当漂亮，但有时逆转录效果反而不好。组织经常出现这种情况，组织抽提的RNA不纯，而且多多少少有降解。不过下一步可以接着做逆转录，可能对后面的实验影响不会很大。2、是mRNA的话，这样的效果挺不错的。如果 ...

2013-08-19

非哺乳动物细胞体系的RNAi实验和选择

比如果蝇，线虫，拟南芥等低等生物和植物，由于不涉及抗病毒免疫应答反应，通过体外转录即可制备目标基因的dsRNA(通常200bp或以上)，直接用长双链RNA进行RNAi实验，不需要另外设计siRNA，因而比较简单。长双链RNA的制备很容易，省掉了设计合成单个siRNA的麻烦，并且长双链RNA在生物体内会被Dicer酶降解为多个siRNAs混合物，因而往往比单个siRNA更有效。长链dsRNA的递送方 ...

2013-08-19

血与泪的RNA抽提经验

对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提，总会碰到问题呢？组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提 RNA 不容易降解。现有的 RN ...

2013-08-19

改善RNA提取的4点建议

在分离RNA时，良好的实验室技术很关键。与DNA相比，RNA更加娇贵，也更不稳定。RNA含有高反应性的羟基（C-OH）基团，确保链不断合成、分解和再次利用。分离出的RNA迅速降解，并很容易受到核糖核酸酶（RNase）的污染。RNase似乎随处可见。加利福尼亚州科学院（California Academy of Sciences）的Jack Dumbacher博士目前正开展转录组和小RNA的分离，以 ...

2013-08-19

病毒RNA提取实验方法[protocol]

2013-07-08

微量RNA的抽提RNeasy MinElute Spin Column（QIAGEN）

2013-07-08

RNA提取的操作步骤

2013-07-08

RNA的制备

2013-07-08

RNA Isolation Protocol from LCM Samples

2013-07-08

RNA 抽提中自备有机溶液的配制及保存问题 (ZHUAN )