我们试验室作NORTHERN的一些总结，欢迎指正，谢谢。Northern杂交准备物品：50ml量筒1个 100ml量筒1个 300ml烧杯1个 250ml 烧杯1个 250ml的锥形瓶1个 10ml 离心管2个 大小盘各1个 镊子1把 剪刀1把 DEPC水500ml 2，瓶玻璃棒1根 电泳槽、转膜槽、梳子、杂交桶 以上物品均用DCPE水处理一、试剂1. 4 M LiCl (50ml) LiCl 8 ...
我们试验室作NORTHERN的一些总结，欢迎指正，谢谢。Northern杂交准备物品：50ml量筒1个 100ml量筒1个 300ml烧杯1个 250ml 烧杯1个 250ml的锥形瓶1个 10ml 离心管2个 大小盘各1个 镊子1把 剪刀1把 DEPC水500ml 2，瓶玻璃棒1根 电泳槽、转膜槽、梳子、杂交桶 以上物品均用DCPE水处理一、试剂1. 4 M LiCl (50ml) LiCl 8 ...
Protocol of Northern blot质粒的转化和扩增质粒的鉴定目的基因片段的切割3.1样品双酶切(175μl水解体系)DW 115μlBuffer B(10×) 17.5μlBaM H 15μlPst I 17μlDNA(MMP-9) 16μlBSA 4.5μl37℃水浴，3h。3.2制胶(1.5%Agarose)0.6g Agarose+40ml TAE(1×)3.3电泳175μl ...
Protocol of Northern blot质粒的转化和扩增质粒的鉴定目的基因片段的切割3.1样品双酶切(175μl水解体系)DW 115μlBuffer B(10×) 17.5μlBaM H 15μlPst I 17μlDNA(MMP-9) 16μlBSA 4.5μl37℃水浴，3h。3.2制胶(1.5%Agarose)0.6g Agarose+40ml TAE(1×)3.3电泳175μl ...
1.RNAi ：（RNA interference）RNA干扰一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi ，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。2.siRNA：(small interfering RNAs)小干扰RNA一种短片断双链RNA分 ...
siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一个RNA polⅢ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol III终止位点。与siRNA表达载体不同的是，SECs不需要载体克隆和测序等颇为费时的步骤，可以直接由 ...
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45―50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA shRNA）在哺乳动物细胞中的表达shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子等。采用RNA pol III启动子的原因是由于它有明确的启始和终止序 ...
1.克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。 2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。 3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效的抑制目的基因。 4.在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C，使插入片段和启动子 ...
1.克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。 2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。 3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效的抑制目的基因。 4.在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C，使插入片段和启动子 ...
美国南加州大学的研究人员报道说，一种新的方法通过活化癌细胞基因组中保护性的microRNA的表达，从而使致癌基因的表达水平显著降低。这篇发表在6月的Cancer Cell杂志上的文章证明已知能调节基因表达的制剂还能够影响调节性的RNA。这种调节性的RNA即为microRNA，它能充当正常细胞中的肿瘤抑制因子，并且还可能成为治疗人类癌症的一种新策略。DNA甲基化作用和组蛋白脱乙酰作用都是属于与基因表 ...
美国南加州大学的研究人员报道说，一种新的方法通过活化癌细胞基因组中保护性的microRNA的表达，从而使致癌基因的表达水平显著降低。这篇发表在6月的Cancer Cell杂志上的文章证明已知能调节基因表达的制剂还能够影响调节性的RNA。这种调节性的RNA即为microRNA，它能充当正常细胞中的肿瘤抑制因子，并且还可能成为治疗人类癌症的一种新策略。DNA甲基化作用和组蛋白脱乙酰作用都是属于与基因表 ...
提 要: 目的 建立一种快速鉴定RNA 完整性的方法。方法 在常规琼脂糖凝胶电泳的基础上结合甲醛变性琼脂糖凝胶电泳加以改进而成。结果 提取的总RNA 用此方法电泳后可得到28S、18S、5. 8S(5S) 三条清晰的rRNA 条带。结论 此方法可以达到对RNA 完整性进行快速鉴定的目的。 随着分子生物学技术的迅猛发展及在医学领域中的普及以RNA 为研究对象的实验与日俱增。RNA 质量的好坏直接关系 ...
提 要: 目的 建立一种快速鉴定RNA 完整性的方法。方法 在常规琼脂糖凝胶电泳的基础上结合甲醛变性琼脂糖凝胶电泳加以改进而成。结果 提取的总RNA 用此方法电泳后可得到28S、18S、5. 8S(5S) 三条清晰的rRNA 条带。结论 此方法可以达到对RNA 完整性进行快速鉴定的目的。 随着分子生物学技术的迅猛发展及在医学领域中的普及以RNA 为研究对象的实验与日俱增。RNA 质量的好坏直接关系 ...
A．普通阴性对照1.siRNA实验应该有阴性对照；2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照；3．Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性；4．阴性对照需要确定和目的靶细胞中其它基因同源性很低。B．荧光标记阴性对照1. RNAi negative control与哺乳动物基因无同源性；2.通过标记荧光，可以方便地在荧光显 ...
INTRODUCTIONThe mechanism of RNA interference has emerged as a practical tool to study loss of function in many organisms. To make the method of gene knockdown suitable for mammalian cells short inter ...
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一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示的 ...
MicroRNA and siRNA Cloning Protocol (UPDATED July 2005)Bartel Lab MITthis is a protocol about MicroRNA and siRNA Cloning Protocol collect from internet:下载protocol: http://web.wi.mit.edu/bartel/pub/pro ...
MicroRNA and siRNA Cloning Protocol (UPDATED July 2005)Bartel Lab MITthis is a protocol about MicroRNA and siRNA Cloning Protocol collect from internet:下载protocol: http://web.wi.mit.edu/bartel/pub/pro ...
从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA 。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般认 ...
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