RNA实验技术

biophysics 搜了一下论坛，未果，我想问一下，使用荧光素酶如何检测某基因为miRNA的靶基因？大概是什么样的步骤呢？才接触，也不了解xuezhishui http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=16590646&sty=1&tpg=1&age=0biophysics 谢谢！您发的帖子我看到了，您的意思是现在常用的方法就是您帖子上写的吗？我看有的文献说看转了片段的荧光素酶载体的活性，如 ...

loyalty 如题。准备做有关肿瘤细胞信号转导机制的研究。疾病模型中A对B的作用。对象：人的肿瘤细胞系。思路：某处理因素作用下,A升高，检测B的升高。A knockdown， B无改变。A knockdown cell 转入携带有外源基因的表达载体，检测B升高。问题1： 因为没有查到与该研究相关的直接相关文献，无法参考，但是我认为信号转导途径的研究大致应该如此。然而，关于Knockdown的方法，如选择RNA干扰，操作方便。但是，在后面的步骤中 ...

redsky 我想验证一个microRNA可以抑制某个基因，并且这个基因又反过来调控这个microRNA ，请问通过什么实验手段才能验证呢？bigbang_0_0 敲除？？？？bigbang_0_0 过表达？？？redsky 我想问一下大家，首先这种情况可能发生吗？buyqcn 这种调控机制属于反馈抑制或反馈激活回路/loop，非常常见。具体研究方法可以参考一下最经典的p53和mdm2反馈抑制回路，有很多这方面的文献。bigbang_0_0 re ...

shaoyibo 请问大侠看篇文献说为检查一调控基因与被调控基因的MRNA水平及二者的关系，先做RT-PCR，后将上述基因重组质粒，最后荧光定量PCR分析，1、RT-PCR可能是用将基因钓出来用于构建质粒用的吗？2、重组后原核表达而不直接RT-PCR后进行表达分析是为什么？freecell 不知道是我老了，还是现在的语文都这么晦涩难懂，还是现在的研究生表述能力下降。我怎么看不懂你的问题呢？1、该文见于何处？ 何不写信给作者询问 ...

PCR352 请教：本人想利用特异性抗体结合CDNA法筛选某蛋白的膜受体，这种方法是否可行？cDNA文库构建工作量大不大？如果构建膜蛋白的cDNA文库，是否就是提取膜蛋白的RNA，然后反转录成CDNA，然后转化就可以了？本人不是生化专业，理论知识欠缺，还请高手指教。zhujoker 为什么用抗体呢？biogenesci 膜蛋白酵母双杂交有专门的试剂盒的，可以找公司问问，这个试剂盒是illumina的，有公司可以代做的，上海海 ...

wz王 想请教一下在microRNA实验中u6还是u6b做内参比较合适？谢谢～看过一些文献用的u6b，但试剂公司推荐u6～zhujoker 看你是做的什么了？因为说实话，现在miRNA还没有一个比较合适的内参，但是你可以自己试一下到底那个好，也不用在乎那多的1000多了。wz王 我做表达丰度差异，之前一直用u6b做内参，这次定试剂时听试剂公司说u6b逐渐要被淘汰，他们推荐u6，我查了下abi公司（Endogenous Cont ...

zz73cxf 外行问，小干扰RNA能否建立质粒后转到哺乳动物体内？有没简明教程或文献？多谢观天 将miRNA克隆到shRNA表达载体,一般转染细胞；转动物，方法就是拿质粒直接注射到组织内，但转染效果不一，现在有很多改进的方法，搜搜就知道了。。zz73cxf 非常感谢，能否详细些？比如想转到动物肺血管内皮细胞，能否直接从静脉打进去？如何鉴定？观天 恐怕要看你要沉默的的基因是不是组织特异性的吧？！要整合到特定组织，没经验你问问专门做 ...

wu_g_f microRNA后带有星号和不带有星号的代表什么意思，例如miR-200a与miR-20undefined。请赐教！zhujoker 你可以上Sanger网站去查，在一定程度上指的是他们是互补序列而已，没有其他的意思。wu_g_f 谢谢版主ghost8469 没有星号代表的是成熟MICROrna的主要产物When the relative abundancies clearly indicate which is the predominantly express ...

大鹏鸟 最近在学习miRNA方面的知识请问各位我在网站上可以查到miRNA预测的靶基因，但是怎么能比较方便地知道这些靶基因的主要作用呢，因为每个miRNA好像都有非常多的靶基因。谢谢zhujoker 不是在每个软件前面都有相应的链接吗？你打开链接就有相应的介绍的啊。你集中你的目标在相应的信号通路或者功能基础，可减少很多麻烦的。大鹏鸟 软件？您说的是什么软件呢？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及 ...

5337605029 请问各位：siRNA和质粒转染有何区别？我最近在做siRNA使某个基因沉默，用的是santa的商业合成的siRNA，我导师想让我做质粒转染，我不知道这两者有何区别，目的不都是沉默某个基因表达吗？请各位指教5337605029 希望各位高手指点小妹！我很迷茫zhujoker siRNA只能做瞬转，而用质粒的话可以建立稳转株。其目的都是沉默目的蛋白的。5337605029 差别就是这些吗？lyfdoctor 转 ...

maria55432 请教诸位是否有人同时提取rna和蛋白，是用什么方法提取的？或者有较好的试剂盒可以推荐吗？多谢！freecell http://www.ambion.com/catalog/CatNum.php?1921maria55432 谢谢，有使用过的人介绍一下经验吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

张明建 请问什么叫unannotated transcript和unannotated miRNA,哪位高人可以回答这个问题啊lmnsmu 非注释转录本和非注释miRNA，我的理解是转录本（或miRNA）目前功能定位等信息不清楚，故称unannotated。张明建 谢谢楼上朋友啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

vonde 某基因体外实验做完了，是肿瘤相关基因，做了RNAi，和体外的细胞系侵袭和转移实验，但又没有体内动物模型，下歩实验该做什么啊？哪位能够给个指导啊？迷茫vonde 该基因表达的蛋白，配体尚不明确，这样的情况，一般能做什么样的研究阿？求助版内高人michaelmichael 用裸鼠做成瘤实验，观察对肿瘤生长的影响。如果RNAi的结果比较理想，你就要研究它的相关功能，靶基因，对细胞周期，增殖，转移以及侵袭的影响，可以到相关 ...

laide123 本人初学者：想请教一下大家，一条mRNA的所有序列（除5端的G,和3端的ployA外）是不是都将翻译成蛋白质，mRNA中是否也存在着与DNA 序列一样的调控MRNA翻译的序列。雪中梅 mRNA中当然存在调控mRNA翻译的序列，一条mRNA中的序列只有从ATG（起始密码子）开始到终止密码子之间的序列（也称开放读框，ORF，open reading frame）才翻译成蛋白，除此之外的其他部分都有可能对mRNA的翻译 ...

linder138 各路战友，请问如何知道某个基因的已验证有效的SiRNA，非常感谢！听说是查找外文文献，但我不知道怎么个途径，查了好几遍都没查到， 我要用到的是乙酰肝素酶的SiRNA。freecell http://scholar.google.com/scholar?q=heparanase+and+small+interfering+RNA&hl=en&btnG=Search&as_sdt=2001&as_sdtp=on很多啊，例如 ...

myskite 怎样找出某基因上的所有miR?zhujoker 在 http://www.ensembl.org/index.html 网站上找到你自己的基因，然后看在相应的区域的miRNA情况即可。本讨论版以前也有这个介绍，注意自己多搜索。biophysics 不明白为什么要找呢?这种有关系吗本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

wuyf 我想看转录因子sp1对我的目的基因的表达是不是有影响，我用sp1siRNA转染细胞，发现与对照细胞相比，细胞内总RNA量减少。sp1siRNA转染细胞大家有做过的吗？freecell 同样结果重复了几次么？做了几个剂量？每个剂量做了几个重复？ffyy8888 :D因为转染了一些东西进去，或多或少会对细胞状态有影响的，你只要将对照做全，就可以呀，怕啥，多做几组对照就可以了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

琼琼qiongqiong 小女子在这里多谢大家的帮忙了，:)freecell cDNA是单链DNA分子cRNA是单链RNA分子。cRNA是cDNA体外转录的产物，其本质的意义是体外扩增mRNA，采用cRNA的主要原因是，cRNA与DNA的杂交结合力远大于cDNA与DNA的结合，使检测结果更加稳定可靠。lmnsmu cDNA是指“complementary DNA”，翻译为“互补DNA”，是由逆转录酶催化，以RNA为模板合成的、与 ...

wulab22 如题:帽子的糖环与核糖核酸链之间是-p-p-p-连接，而核糖核酸链之间的糖环之间是-p-连接，合成酶能识别-p-p-p-吗，能够以帽子结构为模板，在第一链cDNA的3'末端合成c吗？谢谢！wangxiaotong999@163.comdnazyme 5’-RACE技术的意义：可以精确定位转录起始位点。但是定位转录起始位点又有什么意义呢？以RNA聚合酶Ⅱ为例，启动子区一般位于转录起始位点上游200-300bp的范围内， ...

tianjinny 各位大侠，你们好！我现在有一问题需要请教各位,我目前研究的是 miR-451（微小RNA-451），由于目前研究此RNA的文献很少，本人未查到其在人肿瘤细胞中的靶点，不知这样的网站网址是什么。还有一问题，就是癌基因AKT1 、C-MYC与miR-451的靶序列有无互补序列，具体结果是怎样的？盼回复！！谢谢！！freecell 自己看看文献吧，怎么会很少呢。http://scholar.google.com/scholar ...