DNA实验技术

在丁香园见过很多大佬分享载体构建经验，所以我这里写的T载体构建只能算是入门级，给新手提供一点思路，有什么不足之处还希望大家多多指正。我克隆的这个片段大小是1.8kb，用的是TaKaRa的LA-Taq酶做的PCR。反应体系：undefinedbuffer 5 ulMgCl2 5 uldNTPs 8 ulPrimer 1 1 ulPrimer 2 1 ulLA-Taq 0.5 ulcDNA 1 ul (1ug左右基因组DNA）ddH2O up to 50 ul按照TaKaRa的说明书，我用了Cool Start法， ...

本人初来乍到，草译了一篇文献，供各位大虾批评，就图先混个脸熟。癌症治疗中的增殖性腺病毒Alemany R, Balague C, Curiel DT（Replicative adenoviruses for cancer therapy.Nat Biotechnol. 2000 Jul;18(7):723-7. Review. ）摘要： 在癌症治疗领域取得的快速进展就是具有增殖活性的病毒。腺病毒是一种温和的致病性人类病毒，它可在多数人类癌症的起源细胞——上皮细胞中大量繁殖。当病 ...

反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律。反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上，通过对靶基因进行必要的加工和修饰，如定点突变、基因插入\缺失、基因置换等，再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组，让其装配出具有生命活性的个体，研究生物体基因组的结构与功能，以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容。与之相关的研究技术称 ...

Human Genetics: Concepts and Applications(5th edition)Amazon网站介绍： http://www.amazon.com/Human-Genetics-Applications-Ricki-Lewis/dp/007246268XAuthor: Ricki LewisISBN: 007246268XPublisher: McGraw-Hill, 2002Format: PDF - 440 pagesSize: 79.5 MBook Desc ...

摘要：据8月10日刊《美国医学会杂志》上的一则对以往研究的回顾和分析报告披露，作为确定胎儿性别的一种无创伤性的方法，在妊娠7周后从母体血液中获得的无细胞胎儿DNA的检测效果良好，而基于尿液的检测则是不可靠的。无创性产前胎儿性别确认可为人们提供一种重要的创伤性的细胞遗传学性别确认的替代检测，后者目前是确认胎儿性别和单基因病的最可靠的标准。根据文章的背景资料，羊膜穿刺术会带来数量少但却是可检测得到的与手术有关的 ...

在互联网上，有很多软件可以解决分子生物实验人员从立项到最后写论文的实际问题。本文提供了对相同作用的很多软件进行比较后推荐给一线实验人员使用的软件。一、资料收集整理阶段。在这一阶段，需要查找某个专题的文章,并写出对该专题的综述,以便对自己所要做的课题的现状有一个基本的了解。推荐软件：Reference Manager 9.0优点：可以在线通过查找关键词搜索PubMed和609个Z39.50数据库中的专业资料,保存查找的资 ...

基因诊断是通过检测基因的存在状态或缺陷对疾病作出诊断的方法。基因诊断的主要技术：1、核酸分子杂交2、聚合酶链反应（PCR）3、基因芯片技术1 核酸分子杂交技术核酸杂交（Nucleic acid hybridization）是指具有一定同源性的两条单链核酸在一定条件下，按碱基互补的原则重新配对形成双链的过程。一、核酸杂交的基本原理 DNA的变性和复性： 在一定的条件（如适当的温度、有机溶剂存在等）下，DNA的双链可解开成为单链，这一过程 ...

芯片实验设计要点作为一种高通量的实验平台，基因芯片可以同时对多至上万个基因进行表达水平的监测。考虑到芯片实验本身的高成本，实验前对整个实验方案的认真设计就显得非常重要。影响芯片结果的主要方面包括被检测实验材料本身，芯片实验过程，数据处理过程。实验材料实验材料的选用直接影响到最后结果的解释。在选择时要注意以下几点：1.根据实验需要达到的目的，首先要求实验材料具有代表性，如临床标本的取材部位，病人的临床诊断是否明确 ...

2008年初,由上海交通大学第一人民医院黄倩教授和美国科罗拉多大学李川源教授合作,携手北京病毒基因工程重点实验室吴小兵博士研究小组共同完成了目前国际上常用的病毒载体,象腺病毒\腺相关病毒\慢病毒(rAAV2/1, rAAV2, Ad5, Ad5/F35, Lentivirus)等病毒载体在视网膜上的特异性基因转导效率的研究,从而为特殊的视网膜疾病选用特殊的病毒载体进行基因治疗,提供了重要的见地认识!她们的结果发表在Current E ...

无创DNA产前检测技术引领孕检新时代作者: 来源:生物谷 发布者: 亦云 类别:新闻扫描几十年前，生物学家们都发现胎儿细胞会通过胎盘进入母体血液循环系统，但由于技术上没能取得突破，至今生物学家们都不能将这些母体外周血中的胎儿细胞分离出来应用于无创性的产前诊断。转机出现在1997年，香港中文大学的Dennis Lo教授率先发现孕妇外周血中存在“漂流”的胎儿DNA。即便是在怀孕初期，母体外周血中胎儿的游离DNA含量也在5%左右。于是研 ...

如果愿意，可以将某些人的身高调控成姚明那样的大高个、也可以把人类衰老的时钟往后再拨一拨……而这些可能不再是遥远得要苦苦等上几百年的事情了。复旦大学的科研人员最近找到了一种更为高效、快速地**“基因天书”的“密码”，这意味着人类大规模、逐一了解3万个基因中每个基因的功能、并找到基因疾病的根源将不再那么遥不可及。　　据悉，该项轰动世界、被称为“里程碑式发现”的科研成果已由国际顶尖生命科学杂志《细胞》在线刊登，并将刊登在8月12日 ...

基因打靶资料http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=41&id=700550&sty=3&keywords=%BB%F9%D2%F2+%B4%F2%B0%D0http://www.dxy.cn/bbs/thread/1274625http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=544760&sty=3&keywords=%BB%F9%D2%F2+%B4%F2%B0%D0http://www. ...

阳性克隆筛选方法汇总——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法 近几年来，基因重组的技术层出不穷，包括TALEN和CRISPR/Cas9在内的重组技术给基础研究提供更为方便和快捷的分子生物学工具。 关于这些技术的具体原理和操作细节，这里不做展开介绍，主要谈一谈在用这些技术进行细胞株构建的过程中，如何做才能加快阳性克隆筛选的步伐,做好这个关键的步骤。一. 混合克隆pool验证 质粒转染后48-72小时后取转染后 ...

1．溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强 ...

我做质粒小量提取,刚开始的几次实验都没有理想的结果,分析来分析去发现问题可能是培养时间的问题:将菌种从-70度接到LB培养基37度过夜,再用此菌液涂平板获得单克隆,用EP管取1.5毫升LB培养基,用接种环每挑一个菌落每接种一管(将挑到的菌落全洗下去),37度培养约13个小时,直接按照"分子克隆"提供的碱裂法提,结果一无所获.后来在师兄的提醒下我想到是否是因为培养时间过长而使质粒缺失?于是我测了此菌的大致生长曲线,发 ...

1. 假设下列是小鼠基因组DNA的一个片段，其中含有开放阅读框（ORF）吗？若有请标出起始和终止密码子位置。一般来说，该ORF是基因编码序列的可能性大吗？tctcaagaagatgtcgattccattctccaaccatcttagactcttcatgaggaaaaagaggaaaacaagttgaggacacggttttacctccaggac2. 你设计了一对PCR引物，其中上游引物为22个碱基。公司代为合成后提 ...

1）.Reference Manager 9.0实验准备阶段一般要查一些与实验相关的文献以便对自己所要做的课题的最新的进展有一个基本的了解，从而确定自己的实验策略。Manager 可以在线通过查找关键词搜索宋体; "Times New Roman"数据库中的专业资料,同时保存查找的资料为本地文件。资料内容和记录分上下两个屏幕，如有全文或想连接网络时敲键盘就可以到相应的全文文章和摘要。可以直接在WORD中查找资料，并插入引用。在文章中 ...

最新基因组学术语表New Genome GlossaryGenome GlossaryAAdenine (A): A nitrogenous base, one member of the base pair AT(adeninethymine).Allele: Alternative form of a genetic locus; a single allele for each locus isinherited separately from each parent (e.g., at a locus for eye color the allelemig ...

1000 Genomes Project: ready to sequence07/05/2010Erin PodolakData from the three pilot projects recently conducted to determine how to sequence human genomes for the 1000 Genomes Project is now available, moving the project into its next phaseThe 1000 Genomes Project, an internatio ...

文献的作者：Suzuki J, Fukuda M, Kawata S, Maruoka M, Kubo Y, Takeya T, Shishido T.题目：A rapid protein expression and purification system using Chinese hamster ovary cells expressing retrovirus receptor.期刊：J Biotechnol. 2006 Dec 1;126(4):463-74.PMID: 167660742.1. Cloning of EcoRAn ecotropic ...