DNA实验技术

实验准备：1. 植物叶片2. 研钵 液氮3. 移液器及配套无菌枪头（10 μl ，200 μl ，1ml），1.5 ml离心管4. 无水乙醇5. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机实验准备-试剂盒准备：使用前先在漂洗液PW和LP3中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

实验准备：1. 血清/血浆样本（本实验以血清为例）2. 无水乙醇3. 移液器及配套无菌枪头（10 μl， 200 μl ，1ml），1.5 ml离心管4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机实验准备-试剂盒准备：使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。Carrier RNA储存液的配制第一次使用Carrier RNA时，请将Carrier RNA（310 µg）溶解在310 µl RNase-Free ddH2O中，将溶液分装储存于-20Ԩ，此时该溶液的浓度 ...

实验准备：1. 植物叶片 研钵 液氮2. 无水乙醇 巯基乙醇3. 移液器及配套无菌枪头（10 μl， 200 μl ，1ml），1.5 ml离心管4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，实验准备-试剂盒准备1：使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。实验准备-试剂盒准备2：准备实验时，将缓冲液GP1在65℃预热，实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%

实验准备：1. 大鼠肝脏10-30 mg 研磨器2. 移液器及配套无菌枪头（10 μl， 200 μl ，1ml），1.5 ml 离心管3. PBS溶液，无水乙醇4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机实验准备-试剂盒准备使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

实验准备：1. 培养菌液1-5ml （本实验以革兰氏阴性菌为例，革兰氏阳性菌前处理详见说明书）2. 移液器及配套无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml 离心管3. 无水乙醇4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机实验准备-试剂盒准备使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

一、实验准备：1.抗凝血 300 μl~1ml 抗凝全血2.自备试剂：无水乙醇 ；红细胞裂解液（目录号：RT122）；3.移液器及配套无菌枪头（200 μl ，1ml）； 1.5 ml 离心管4.涡旋振荡器 金属浴/水浴 台式离心机备注：本实验以人血为例，如提取哺乳动物全血可以用此流程，如果禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，红细胞有核细胞，因此处理量为5-20 μl，加缓冲液GS补足200 μl；当处理血样为血凝块，可选择液化柱CX1（TIANGEN，RK165）（需自备 ...

微生物基因组编辑微生物被广泛应用于制药、农药生产、食品工业、能源以及一系列新兴的应用，通过对微生物开展基因组研究，不断发现新的特殊酶基因及重要代谢过程和代谢产物生成相关的功能基因，并将其应用于生产以及传统工业、工艺的改造，在生物制药、污染治理、能源及化学品生物制造产业具有一定的应用价值。早期的菌种改造主要集中于随机筛选和简单的理性筛选，但是传统方法耗时、费力、工作量大且诱变结果不具定向性的缺点随着时间推移也逐渐 ...

动物模型构建CRISPR-Cas9 系统作为最新一代基因编辑技术，能够简便高效地实现基因组精确 修饰，是制备哺乳动物疾病模型的重要工具。目前科学家利用 CRISPR-Cas9 技术在动物模型，如小鼠、大鼠、猪 和猴等研制方面做出一系列重要工作。如科学家们将 CRISPR-Cas9 系统导入小鼠受精卵，成功获得了有特定基因突变的小鼠模型，并获得近乎 100% 的基因靶向突变效率，极大地降低了基因编辑小鼠模型制备的难度和成本，有望被广泛应用。背景：使用 ...

基因编辑技术的飞速发展, 特别是近年来 CRISPR 技术的广泛应用，使得人类拥有了前所未有的改变和修饰基因组的能力。CRISPR 技术来源于细菌本身对抗噬菌体的「免疫系统」，这项技术利用单链引导 RNA(sgRNA) 和 Cas9 蛋白，可以在体内和体外简单、迅速、低成本实现基因编辑。利用 CRISPR 技术不仅可以对编码基因进行有效编辑和基因组的大规模筛选，而且还可以结合 NGS 对非编码 RNA（ncRNA）进行功能研究。CRISPR 技术已经广泛应用于全球各个 ...

纳米技术的最终目的是使人类能够按照自己的意志操纵单个原子，在 0.1-100nm 空间尺度内制造具有特定功能的产品，实现生产方式的飞跃。纳米技术在临床中的应用是我们关注的焦点之一。然而，虽然纳米药物的研发如火如荼，但能真正上市的品种为数不多，而且几乎都集中在癌症治疗领域。造成这种情况的原因之一就是纳米技术可能会造成不确定的生物学后果。这篇文章将着重突出斑马鱼模型的特点和用途，希望此文能够对不熟悉斑马鱼的研究人员起到一 ...

实验原理「彗星」实验又称单细胞凝胶电泳实验，是一种通过检测 DNA 链损伤来判别遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中 DNA 单、双链缺口损伤的程度。当各种内源性和外源性 DNA 损伤因子诱发细胞 DNA 链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到电解液中，而核 DNA 由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。在中性条件下，DNA 片段可进入凝胶发生迁移，而在碱性电解质 ...

1. CRISPR/Cas 简介CRISPR-Cas 是细菌和古细菌在自然界生物长期的进化过程中，演化出了一种独特的适应性免疫系统。在该系统中，一种称之为 Cas 的限制性内切酶能在短链 RNA 的引导下，靶向降解外来入侵的 DNA 或 RNA，人们将这一系统命名为 CRISPR-Cas，即成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关基因 （Clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associ ...

啊啊啊，要怎么样才能 KO 肿瘤小怪？急求，在线等！--日夜奋斗的医学君「嘿嘿，让小编来拯救陷于水火中的你，教你如何四步打败肿瘤小怪，顺利升级。第一步：体细胞变异检测，知己知彼方能百战不殆。第二步：易感基因筛查，铺开战线，地毯式搜索。第三步：NMF 突变频谱和突变特征分析，搞清局势，开始攻城略地。第四步：高频突变基因统计及通路富集分析，见缝插针，顺利 KO！小伙伴们，看明白了吗？贴心的小编将结合真实案例，为大家详细讲解肿瘤对抗攻略，Let's go ...

腺相关病毒属于微小病毒科（parvovirus），为无包膜的单链线状 DNA 病毒，基因组大小约4.7kb.腺相关病毒可利用病毒载体将外源基因转入动物组织和细胞中，具有安全性高、免疫原性低、宿主范围广、表达稳定等多种优点，广泛应用于动物体内研究。腺相关病毒血清型众多（12种），不同血清型对不同组织亲和性不同，因此在具体科学研究中，以下问题往往困扰着广大科研工作者：选择何种血清型？如何注射？注射多少病毒？注射部位如何选择？注射多 ...

基因枪法 ( Gene gun) 又称粒子轰击、高速粒子喷射技术或基因枪轰击技术， 是由美国 Comel 大学生物化学系 John. C. Santord 等于 1983 年研究成功。首先在植物中获得成功应用。通过动力系统将带有基因的金属颗粒 ( 金粒或钨粒) ，将 DNA 吸附在表面，以一定的速度射进靶细胞，实现稳定转化的目的。小颗粒穿透力强，不需对靶细胞进行修饰。基因枪具有应用面广、方法简单、对治疗基因的大小要求不严格、转化时间短、瞬时表达持续时间长、一次处理多个细胞、安全性高等优点 ...

急性红细胞白血病（AEL）是白血病（AML）亚型中的一种，在老年人白血病中的占比较高。相对于其他类型的AML，AEL病人有更加poor-risk的细胞遗传学异常和不良的预后。虽然针对AEL的外显子突变位点发现已有一些报道。但是，针对AEL的完整突变谱发现还没有相关报道。研究人员运用外显子组测序技术，发现了AML相关的高频突变基因GATA2和CEBPA等突变，为理解急性红细胞白血病的发生发展过程提供了新的证据。研 ...

科研君们，当埋头实验几月找到了目标基因片段，电泳时条带却突然消失了；千辛万苦分离纯化的物质，色谱图中却意外出现杂质峰，苦苦查询，可能仍找不到问题原因。若问题只在小小的吸头上，科研君的心还能淡定吗？吸头的问题在哪里，如何保证纯净无污染的吸头？需要考虑以下几方面因素：一、 吸头材质吸头市场上，原材料基本都是聚丙烯塑料（低吸附，化学惰性高，使用温度范围广，无色透明）。也许大家不知道的是，同样是聚丙烯，品质会有大的差别。高品质的吸 ...

寨卡病毒通过识别放射状胶质细胞垂直传播影响小鼠后代的大脑皮层发育 寨卡病毒（Zikavirus，ZIKV）是一种单链RNA病毒，可通过蚊子进行人类之间的传播。可引起无症状传染或者温和病症，包括发热，身体不适，发疹以及结膜炎，极少数会通过损害周围神经系统引发急性感染性多发性神经炎（Guillain-Barre syndrome）。最近ZIKV在美洲地区，尤其是巴西大规模流行，导致了新生儿头小畸形比例的增加。有文献报道了小头 ...

一、亚硫酸氢钠修饰过程中可能出现的问题及应对措施亚硫酸氢钠修饰DNA的目的是将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶，而甲基化的5一甲基胞嘧啶保持不变。影响此过程的主要因素有修饰试剂的浓度、反应温度、反应环境的pH值及反应时间。其中任何一个环节出现问题都将导致MSP扩增失败，体会如下：(1)亚硫酸氢钠的浓度最好控制在3.0～3.9 mol/L为好，其pH值必须用NaOH精确调整至5.0；(2)修饰时间应掌握在10～ ...

开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全。细胞与试剂方面：1、细胞(单层细胞，镜检适合)2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1 万单位）4、7.5％NaHC03 溶液5、0.25％胰蛋白酶6、PBS 洗液。实验小用具方面：1、小方瓶(100m1)2、克氏瓶3、胶塞4、吸管(10ml、1m1）5、细胞吹打管（20 ml）(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)6、 ...