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【旧帖整理】分子杂交(精彩内容等着你)

该贴内容较多,我花5天才整理成这个样子,但仅我一人之力,虽劳苦却难以求全,遗漏之处难以避免,请大家补充分子杂交分子杂交(综述)1、Southern杂交1-1、southern-blot protocolSOUTHERN BLOT PROTOCOL(English version)SOUTHERN BLOTTING操作手册DIG Application Manual非放射性的southern 杂交方法Southern转膜的方法Southern/ ...

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【共享】PET重组质粒转化表达质粒中遇到的问题

晚上每天都有人做报告,我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的,但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的,我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的,一生研究T7噬菌体,也是T7 RNA polymerase induction system(pET系列质粒)的发明者。T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了 ...

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农杆菌介导的水稻转基因程序

1双元载体的农杆菌转化1.1农杆菌感受态细胞的制备1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线,28℃培养。1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中,220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中,28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。1.1.4. 转入无菌离心管,5000rpm离心5min,去上清液。1.1.5. 加入10ml预冷的0.1M的CaCl2 ...

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[分子生物学技术讨论区]★精华★索引

分子生物学技术讨论区精华索引说明:分子生物学技术讨论区本由Yong主任提议开辟便于大家讨论分子生物学方面问题,但大量所要书籍的跟贴严重妨碍了对技术问题的讨论,导致该贴被锁定。然其中有不少精华帖子亦被淹没,偶心中不忍,奋战几日,将一些对大家可能有所帮助和启发的帖子集中于此,制成索引,有归纳不当之处,还请Yong主任及其他站友指出!基因表达与克隆方面:http://www.dxy.cn/bbs/thread/40236h ...

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转载-网页方式下利用BLAST 程序进行基因/蛋白质序列比对

美国国家生物技术信息中心(National Center of Biotechology Information ,NCBI) 充分利用Internet ,为用户提供了丰富的生物信息资源。NCBI 的BLAST 程序是进行核酸序列和蛋白质序列相似性比较的优秀工具。1  BLAST简介NCBIBLAST(Basic Local Alignment Search Tool ,局部对比基本检索工具) 是将核酸序列或蛋白质序列与可用的序列数据库进行相似性比较的一系列程序。其核 ...

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【原创】CRISPR/Cas9系统的发现历史和应用

【CRISPR/Cas9系统的发现历史和应用-@华夏凯奇】-兼谈八卦。水平有限,不准确和班门弄斧之处,还望大家斧正。copyright@华夏凯奇一、CRISPR系统的发现-从细菌的获得性免疫说起CRISPR系统实际是细菌的一种获得性免疫系统。细菌被phage侵染之后,可以获得phage的DNA片段整合进基因组形成记忆,当再次遭到入侵时,从对phage形成免疫。1) 早在1987年,日本人在大肠杆菌中发现有串联间隔重复序列 ...

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【转帖】英《新科学家》评选出2008年十大典型基因话题

英《新科学家》评选出2008年十大典型基因话题 据《新科学家》网报道,2008年,有关基因的话题数不胜数,很多公司利用有关基因的科研成果赚了不少钱。遗传学关于基因对人类的行为有着决定性作用的说法也越来越流行,我们不得不重新用一种新的视角来看待我们的生活。《新科学家》网站为我们评选出了2008年十大最典型基因话题。让我们来一一回顾。1、测试自己的基因 预测自己的未来“基因检测”,这个过去几乎不为人知的科学名词,最近频繁出现在 ...

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染色体技术(1)

外周血培养基配制一、配制用水培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。二、培养基培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2~7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐 ...

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【申请上传】分子生物学和细胞培养技术方面的书

版主:最近小弟买了两套最新的《细胞培养技术》以及《分子生物学实验技术》的光碟,大约有1.1G,有需要的兄弟没有,如果有的话怎么样才能与大家共享?今天,我先把《分子生物学实验技术》光碟所包含的书名列在下面,请大家过目!1、《Molecular Cloning :A laboratory manual 》2、《PCR Cloning Protocols》Second Edition ,433页3、《PCR Mutation Detection Protocols》223 ...

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【公告】核酸基因技术讨论版发贴注意事项&加分标准(修改稿)

欢迎来到《核酸基因技术讨论版》:本版归属于“实验技术讨论区”,以讨论各种以核酸基因为对象的理论和实验技术。本版的宗旨是为您提供各种核酸基因的相关理论和实践经验的交流平台!欢迎您参与交流!发贴必读&加分标准:1、本版欢迎0分站友参与讨论,加分特优。20分以下的战友,加分从优。2、对置顶的零回复帖进行回贴的战友,加分从快从优。3、对本版置顶帖子的讨论,或积极参与各位斑竹发起的各种活动,加分从优。对本版的建设提出任何意见或建议 ...

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【共享】“小”提质粒的“大”学问(转载)

复旦大学某教授写的有关质粒的好文,贴在这里与大家共享:从质粒抽提谈起碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了,几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因,我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤,而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研 ...

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【共享】microRNA protocols (english edition)

MicroRNA ProtocolsEdited by Shao-Yao YingDepartment of Cell and Neurobiology, Keck School of Medicine,University of Southern California, Los Angeles, CAContentsPreface ............................................vContributors .......................................xi1. The MicroRNA: Overvi ...

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【共享与讨论】全基因表达谱差异研究方法

全基因表达谱差异研究有这些方法,EST测序(成本巨大)、DDPCR(特异性差,基本已经不用)、基因芯片(技术上比较复杂,数据处理工作量大)、SAGE技术(相对较科学,实验数据较可靠、花费较大)等。个人推荐:(本人原创,请斑竹加一分表示鼓励)cDNA-AFLP是从AFLP (amplified fragment length polymorphism) 衍生而来的RNA指纹识别技术,现已发展成较为成熟的转录组研究技术(Donson, et al., 2002) ...

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【交流】总结一下最近做大片段克隆的心得

总结一下最近构建质粒的心得,最近构建这个质粒已经有2个月了,一直没成功,到最近才有点眉目,只等测序了。其实质粒构建很容易,但有时候就是得不到结果,对于大片段(》3kb)要克隆到载体里,还是有难度的。首先介绍一下背景,我的质粒是pcDNA3.1+,片段是4371bp,刚开始我是用cDNA跑PCR,用的是高保真的酶,PCR产物也很完美,浓度也不低,用的是NotI单酶切,然后把质粒去磷酸化后再做连接,在百度上搜索到有人介绍说 ...

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《分子克隆参考》编委会(暂定)

--------------------------------------------------------------------------------丁香园生物技术参考书供所有DXY战友使用分 子 克 隆 参 考主编 (暂缺)副主编 (暂缺)编辑 liven dqlover biowind wangjun2002274 biotin编者 (报名参加的战友,排名不分先后)zein第一章 质粒DNA的碱裂解法提取与纯化第二章 基因组DNA的碱裂解法提取与纯化第六章 感受态细胞的制备newdragon第一章 质粒DNA的碱裂解法提取与纯化y ...

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我收集的几个Northern杂交protocol(同位素,DIG,生物素等),供大家参考!

我也是从网上收集过来的,仅供相关人员参考!DIG标记的Northern杂交试验指导一、 RNA提取方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液:贮存液-在含484ml 水(经DEPC处理), 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠(pH7.0)和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍,加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备用(不超过3个月)。工作液-在每50ml贮存液中加入0.3 ...

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【丁香园引物库―― 积分放送】

PCR技术在分子生物学领域的重要性自不必多说,各种新的PCR技术也不断涌现。引物的设计是进行各种PCR的重要前提条件。虽然现在有很多软件可以设计并评价引物,但在实际的PCR扩增过程中,必须对反应体系和反应条件进行优化,尤其是引物浓度,Mg2+浓度,退火温度等。有时候无论我们如何优化,也拿不到目的产物,只能重新设计。鉴于在引物的设计和合成过程中所花费的时间、精力和财力(尤其对于新手而言),本着资源共享的原则,建立丁香 ...

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【旧贴整理】启动子

本版有较多关于promoter的讨论,其中不乏精彩好贴,本人也受益较多,现试着总结归纳了如下,希望对大家有用:  启动子是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位,也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中,转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。启动子一般可分为两类:  (1)一类是RNA聚合酶可以直接识别的启动子。这类启动子应当总是能被转录。但实际上也不都如此,外来蛋白质可对其有影响, ...

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腺病毒载体的最新选择,促进国内基因治疗科研的成果转化

国家人类基因组北方研究中心对外开展重组腺病毒构建包装服务通过与美国Vector Biolab公司合作,国家人类基因组北方研究中心(北京诺赛基因组研究中心有限公司)利用优越的实验条件和训练有素的科研人员,成功构建的一个集克隆、包装、扩增、纯化为一体的重组腺病毒构建技术平台。从2005年7月成立腺病毒小组并开展实验至今,为课题组内部完成包装200多个腺病毒,为Vector Biolab公司成功包装近300个腺病毒,并且 ...

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【共享】最新细胞影像学分析技术——SNAP-Tag

New England Biolabs(NEB 公司)隆重推出蛋白质标记 SNAP-tag 最新技术,该项技术可以在活细胞及固定细胞中研究蛋白质的功能和定位。SNAP-tag 技术能将哺乳动物细胞体内蛋白质成像并且体外捕获蛋白质,为研究蛋白质提供了强有力的工具。其工作原理是:构建基因,表达融合蛋白质,再与多种荧光基团、生物素或磁珠形成共价结合。为了使用方便,NEB 提供两套系统:一套是标记物可以直接自我标记构建好的融合蛋白质(SNAP-tag 和 ...

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