(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) A. Sonication The generation of DNA fragments by sonication is perform ...
alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f ...
Used to removed unincorporated nucleotides from labelling reactions. Prepare Sephadex G-50 (medium) by adding appropriate amount of dry beads to 100 ml TE buffer such that the beads will swell to 50 m ...
Materials: 10X restriction enzyme buffer (see manufacturer's recommendation) DNA sterile water restriction enzyme phenol:chloroform (1:1) 1.Add the following to a microfuge tube: 2 μl of appropria ...
CAT ASSAY 1. Transfer cells to a 15 ml tube. 2. Add 5 ml TBS- to flasks shake & pour into tubes. 3. Spin down the cells @ 1k rpm for 5'. 4. Resuspend in 1 ml TBS- . 5. Transfer to 1.5 ml tube ...
Pyrosequencing 在肿瘤基因甲基化研究的应用 甲基化研究对于基因的调控和肿瘤的发生有非常密切的关系。在一般正常的细胞中，基因调控区CpG岛处于非甲基化的状态。而当细胞发生癌变后，这些CG区域往往呈现甲基化状态。英国医学刊物《Lancet》报道奥地利因斯布鲁克医学院的专家们早就可以通过检测大便中DNA的甲基化变化，把健康人的大便与结肠癌患者的大便区分开。大便标本中SFRP2 甲基化的程 ...
The restriction/modification system in bacteria is a small-scale immune system for protection from infection by foreign DNA. W. Arber and S. Linn (1969) Plating efficiencies of bacteriophage lambda (l ...
alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f ...
平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5—10uT4RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较 ...
点击浏览该文件 ...
所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。 亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。 一、试剂准备 1．LB液体培养基：胰化蛋白胨（细菌培养用）10g，酵母提取物（细菌培养用） 5g，NaCl 10g，加ddH2O 至1000ml，完全溶 ...
1. Cut DNA with 5'- and 3'- overhangs gel check phenol-Sevag extract and NaOAc/EtOH ppt. 2. Prepare one S1 nuclease tube (on ice) for each time point: 15ml S1 Buffer + 0.25U S1/ml (5U). 3. Us ...
Adapted from Frommer et.al.* 1.Dilute DNA (up to 2 mg) into 50 ml with distilled H2O. 2.Add 5.5 ml of 2M NaOH. 3.Incubate at 37℃ for 10 minutes (to create single stranded DNA ). 4.Add 30 ml of 10 ...
Publisher: Bios Scientific Publishers Ltd Number Of Pages: 608 Publication Date: 2002-06-15 Sales Rank: 4476658 ISBN / ASIN: 1859962289 EAN: 9781859962282 Binding: Hardcover Manufacturer: Bios Scienti ...
reagents: DNA for labeling (concentration c > 150 ng/µl) modified nucleotides: Biotin-16-dUTP Digoxigenin-11-dUTP conc. 1nmol/µl (Boehringer Mannheim) dNTPs (regular nucleotides): dATP ...
转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA （质粒和线性双链DNA ），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科 ...
PCR克隆主要有TA克隆法 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。 但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。 TA克隆方法（Original TA Cloning Kit） 利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动 ...
1. Remove gel slice contain DNA fragment and place in 10 volumes of: 300 mM NaOAc, pH 7.0 300 ml 1 M NaOAC, pH 7.0 1 mM EDTA 2 ml 500 mM EDTA, pH 8.0 698 ml ddH2O 2. Incubate at 22℃ for 30 min. Transfer gel slice to a fresh tube. 3. Place tube in a Dry Ice/Ethanol bath for 5 min. 4. Puncture the bottom of a 0.5 mL microcentrifuge tube with a needle. Place the gel slice into this tube. Place this tube inside a 1.5 mL microcentrifuge tube. 5. Centrifuge for 15 min. 6. Collect the Eluent from the 1
1. Remove 0.5 cm of tail into polypropylene microfuge tube (do not mince). (The tubes must have tight-fitting caps so that there are no leaks in steps 3 and 7 below.) 2. Add 0.5 ml DNA digestion buffe ...
序列测定的技术和策略 Sanger双脱氧链终止法 Maxam－Gilbert DNA 化学降解法 测序策略 目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA 上 ...
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
