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This is a scaled up version of the Baron protocol which has been modified to achieve purity comparable to CsCl preps. I have not sorted out strain variations yet but HB101 works well. 1、Solutions Sol ...
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所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆,其目的在于对目的DNA进行进一步分析,或者进行重组改造等。 亚克隆的基本过程包括:(1)目的DNA片段和载体的制备;(2)目的DNA片段和载体的连接;(3)连接产物的转化;(4)重组子筛选。 一、试剂准备 1.LB液体培养基:胰化蛋白胨(细菌培养用)10g,酵母提取物(细菌培养用)5g,NaCl10g,加ddH2O至1000ml,完全溶解,分装 ...
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Probes should be stored frozen both when lyopholized or in solution. Aliquoting your probe into additional vials after resuspension can help to minimize potential breakdown due to ...
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T-RFLP中文可翻译为:末端限制性片段长度多样性,又可以称为16sRNA基因的末端限制性片段分析技术。是一种新兴的研究微生物多态性的分子生物学方法,日亦受到研究人员的重视。该技术已经成功应用于各种微生物群落的分析比较、研究微生物群落多样性及结构特征等多方面。 T-RFLP的技术原理是根据的保守区设计通用引物,其中一个引物的5‘末端用荧光物质标记,常用荧光物质有HEXTET6-FAM ...
在分子生物学研究中,DNA 的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert(1977)发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大,但都是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生A,T,C,G四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得DN ...
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所谓亚就是对已经获得的目的片段进行重新,其目的在于对目的进行进一步分析,或者进行重组改造等。亚的基本过程包括:(1)目的片段和载体的制备;(2)目的片段和载体的连接;(3)连接产物的转化;(4)重组子筛选。 一、试剂准备 1.LB液体培养基:胰化蛋白胨(细菌培养用)10g,酵母提取物(细菌培养用) 5g,NaCl 10g,加ddH2O 至1000ml,完全溶解,分装小瓶,15lbf/in2高压灭菌 ...
It is best to do a test ligation without insert if the background is low it would not be necessary to screen colonies for insert. 1.colony PCR 1) Pick a colony from plate and suspend the colony in 10 ...
一、克隆 的早期研究 克隆 一词是英文单词clone的音译,作为名词,c1one通常被意译为无性繁殖系。同一克隆 内所有成员的遗传构成是完全相同的,例外仅见于有突变发生时。自然界早已存在天然植物、动物和微生物的克隆 ,例如:同卵双胞胎实际上就是一种克隆 。然而,天然的哺乳动物克隆 的发生率极低,成员数目太少(一般为两个),且缺乏目的性,所以很少能够被用来为人类造福,因此,人们开始探索用人工的方法 ...
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1.grow up single colony in 1.5 ml LB/antibiotic ovn @37℃ . 2.pour into tube spin for 30 sec . 3.decant supernatant and resuspend pellet in 100 ml lysis solution . 4.add 200 ml alkaline SDS vortex well ...