DNA实验技术

1) 取10μl待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL，1.0%凝胶) 2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号， 拍照记录电泳结果(拍照时， 凝胶旁放一尺子)。 3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一) A. 将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15min，使DNA脱嘌呤。 B.用蒸馏水短暂洗凝胶2次。 C. ...

重组DNA技术是现代分子生物技术发展中最重要的成就之一。即是基因工程(Gene Engineering)的核心技术。 重组DNA技术（Recombinant DNA Technique）是人类根据需要选择目的基因（DNA片段）在体外与基因运载体重组，转移至另一细胞或生物体内，以达到改良和创造新的物种和治疗人类疾病的目的。 这一技术的发展和应用，关键在于限制酶的发现和应用。 一、限制酶 限制性内 ...

The Minion Lab College of Veterinary Medicine at Iowa State University http://mycoplasmas.vm.iastate.edu/lab_site/methods/DNA/SmaIvector.html ...

Purification of PCR fragments for cloning (adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) After an aliquot of the PCR ...

稀释限制性内切酶时，建议使用稀释缓冲液（A，B，C）。建议临用前稀释且稀释终浓度不要小于1000 units/ml。目录及说明书中标注了每一种内切酶相应的稀释兼容性。 注：以下稀释液不适用于耐热DNA聚合酶。欲了解稀释耐热DNA聚合酶的相关情况，请参见相应章节。 稀释缓冲液成份： 稀释液A： 50 mM KCl 10 mM Tris-HCl 0.1 mM EDTA 1 mM DTT 200 &m ...

Table of Contents 10X TBE 40% Acrylamide Stock Alkaline lysis solution 10X TBE: 216 g Tris base 110 g boric acid 16.6 g EDTA Add water to 2 liters. 40% Acrylamide/Bisacrylamide (40% A&B): 38 ...

【基本原理】 此试剂盒用于质粒DNA小量纯化。该试剂盒采用了传统的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需1小时便可完成。 使用本试剂盒可从1-4ml 的过夜培养的菌液中纯化得到1～20μg的高纯度质粒DNA，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。 【器材】 1．离心机 2. Spin Column 3. Collection Tu ...

Has anyone used CTAB to remove polysaccharide during DNA extraction? I tried to use it under high NaCl but have had coprecipitation problem. My lysis buffer contains Tris EDTA NaCl and SDS. After solv ...

1、将已经电泳确定的可回收的酶切产物在合适浓度的回收用琼脂糖凝胶进行电泳。最好换用新的电泳缓冲液10 × TAE（10 ×Tris-乙酸）。 2、当溴酚蓝迁移至足够距离时（至少2 cm以上），在长波紫外灯下观察，用清洗过的刀片在目的片段前切下与目的片段同长，宽度适当（一般2 cm左右）的胶块。 注意： ①不要忘记在胶下垫一个新的塑料手套防止污染。 ②小心不要将回收胶切裂，同 ...

7.1. ...

Most recent version of protocol: 2/14/96 Dr. Paul J. Zambino Research Plant Molecular Pathologist U.S.D.A. Forest Service North Central Forest Experiment Station Forestry Sciences Laboratory 5985 Hwy. ...

临床医生了解基因诊断质控指标的含义，对于合理地选择检测方法和正确地分析与解释结果有很大的价值。 1．灵敏度 简单地说，灵敏度就是检测的最小值。一般来说，我们希望某一种检测技术的敏感度越高越好。理想地，病原体分离培养时能从待测标本中找到一个细菌或一个病毒颗粒或其他任何一个病原体；免疫学检测时，能测出一个抗原或抗体分子，等等，但这些通常都很难做到。然而基因检测则能达到这个理想境界，但在临床实践中，我 ...

Quick question as I have read all sorts of views on this before: How long can bisufite-treated DNA be stored in -80℃ freezer before it degrades. Is there any reason why it should degrade quicker than ...

一、概述 ...

实验原理: Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物（如硝酸纤维素膜、尼龙膜）上，使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段，进行琼脂糖凝胶电泳，各片段因分子量不同而彼此分开，然后经碱处理凝胶，使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作用在高盐缓冲液中在原位将单链核酸转印到硝酸纤维膜上，烘干、固定。 试剂和器材 一、试剂 变性液：1.5mol/L NaCl ...

准备工作： 细菌培养：小量提取质粒DNA 鉴定正确后，将菌液以1/50~1/20体积的比例接种到250ml液体培养基中，37℃振荡培养过夜至对数生长晚期。 注：培养体积与最终质粒DNA 的收获量并无线性关系。只要培养条件适宜，50ml的培养液有时也可得到总量高达1mg以上的质粒。 操作步骤 ： 1、细菌的收获：将菌液倒入合适的离心管中，8000g离心5分钟，弃上清，并在吸水纸上倒置离心管使上 ...

Hey folks I need Help!! Please! I have to put a 3.5 kB fragment into a 6.5 kB vector. The vector has a Km resistance gene. I use invitrogen chemically competent cells. This is what I do: I PCR amplify ...

This kit contains materials for six groups to perform Southern transfer and hybridization analysis using the included lambda DNA samples and biotinylated probe. The intellectual objective of the exper ...

采用地高辛高效标记混合物(ROCHE) 标记DNA探针 将10 ng~3μg的DNA探针（基因组、质粒或基因片段）用蒸馏水稀释至16μl 煮沸10分钟使DNA变性，迅速放在冰上冷却，以防其重退火。 加入4μl地高辛高效标记混合物，振荡混匀 37℃下过夜培养 加入2μl 0.2M EDTA (pH 8) 使反应停止，并于65℃ 下10min加热降低其活性。 使用前煮沸探针10 ...

1.Excise DNA section from gel into eppendorf tube. 2.Add 2-3 volumes of NaI (NaI for geneclean - dissolve 89.9 g NaI in 100ml dH2O store in light proof bottle) solution to gel fragment (best to be on ...