DNA实验技术

按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern analysis的结果进行标准化，因为DNA 变异程度比总RNA 或组织重量要小。 实验所需但试剂未提 ...

本法的产量要低得多，但却比本章所述的其他方法更温和，是提取大质粒(大于15kb)的首选方法。 试验步骤: 1、将500ml细菌沉淀物洗过后重悬于10ml用冰预冷的10%蔗糖、50mmol/L Tris.Cl(pH8.0)溶液中，将悬液移至30ml的带盖螺口塑料试管中。 2、加入2ml新配制的溶菌酶溶液。当溶液的pH值小于8.0时，溶菌酶不能有效地发挥作用。 3、加8ml 0.25mol/L EDT ...

does anyone have a reasonably successful protocol for isolating dna from bones---bones that are highly compromised in integrity---i.e.really bad shape? I've tried and am well seasoned in the tra ...

Denatured Salmon Sperm DNA is used in prehybridization and hybridization solutions to reduce background signal.The Salmon Sperm DNA (Sigma No.D-1626)is first "denatured" in large volumes and ...

Sugden labMcArdle Laboratory for Cancer ResearchUniversity of Wisconsin-Madison Medical School DNA /EMSA.pdf">http://mcardle.oncology.wisc.edu/sugden/Protocols/PDF files/Association of protein ...

The standard solution typically used for both pre-hybridisation and hybridisation is based on that given in Maniatis et al.(1982)with both Denhart's solution and heterologous DNA being replaced by hep ...

1.对于微量DNA样品溶液（如100ml以下），应预先将DNA溶液以TE或无菌水稀释至一定体积。以减少第5步中的DNA损失。 2.加入等体积的酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）。 3.剧烈振荡管中内容物，将水相和有机相充分混匀，使之成为乳浊液。 4.室温下静置以初步分层。再用离心机于室温以10000rpm离心至少5分钟以上，使无机相与有机相充分分开。 5.用剪去尖头的微量移液器枪头小心移出 ...

一、目的 鉴定载体与目的基因是否已经成功连接成新的重组质粒。 二、原理 载体pUC18具有一个EcoRI 和HindIII的单酶切位点，含氨苄青霉素抗性基因。目的基因设计时分别在上、下游引物中加入了EcoRI 和HindIII单酶切位点，两者双酶切后，经连接酶连接，连接成功就形成了新的重组质粒。 在含50μg/ml Amp、40ml X-gal 储液和4μlIPTG 储液LB 固体平皿 ...

对于大的基因组，DNA 酶切图谱凭肉眼是分辨不开的（EB 染色），因为大小不等的分子呈现弥散分布，只有借助灵敏的放射性同位素（或其他化学发光物质），将靶 DNA 在凝胶上（膜上）的带型通过特定的探针与之杂交，转换成 X 光片上直观的带型，才能进行相关分析。另外如果需要鉴定或寻找与已知 DNA 同源的 DNA 片段如：染色体步查、基因组文库的评价和利用、阳性克隆的分析鉴定、转基因拷贝数分析等也都需进 ...

DNA methylation is an epigenetic event that affects cell function by altering gene expression and refers to the covalent addition of a methyl groupcatalyzed by DNA methyltransferase (DNMT)to the 5-car ...

1.Safety precautions Hoechst 33258 is carcinogen and toxic.Use with adequate ventilation.Avoid contact with eyesskinclothing.Wash after handling.Keep container closed. 2.Rationale For biochemical qu ...

MATERIALS: ...

一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等，它们对多种天然蛋白均有活性，（1）用酚 ...

试验原理: 大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化常用柱层析法和氯化铯梯度离心法。常使用的所有纯化方法都利用了质粒DNA 相对较小及共价闭合环状这样两个性质。例如用氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心分离质粒和染色体DNA 就取决于溴化乙锭与线状以及与闭环DNA分子的结合量有所不同。 溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加作为补偿将在闭环质粒DNA中引入超螺 ...

Section of Cancer GenomicsGenetics BranchNCI National Institutes of Health Reagents Chloroform EDTA0.5 M Ethanolabsolute Isoamyl alcohol SigmaCat.I-3643 Phenol Phosphate Buffered Saline (PBS)1X Protei ...

SNGENIMHNIH http://intramural.nimh.nih.gov/lcmr/snge/Protocols/Miniprep.html SOLUTIONS: •Resuspension buffer: 25mM Tris-HCl (ph8) 50mM Na2 EDTA 1% glucose Autoclave and store at 4℃. •NaOH/ ...

RNA/Zeta Probe Dot Blotting protocol 1)Make up RNA (up to 20μg)dissolved in sterile H2 OTE or 0.5% SDS to 500μl with ice-cold sterile 10mM NaOH1mM EDTA and apply it to Zeta Probe membraneheld in ...

长时间反应时内切酶的活性保持情况因酶而异。本表中列出了在16小时内完全酶解底物DNA所需的最小酶量。 实验方法：在50µl的反应体系中，分别加入1µg的单位定义底物DNA和1.00、0.50、0.25和0.13个单位的内切酶，37℃（或要求的最适温度）反应16小时。用琼脂糖凝胶电泳法来确定在16小时内酶解1µg底物DNA所需的最小酶量。 16小时酶 ...

Solutions Protocol: Digest 5-10 μg genomic DNA overnight with restriction enzyme of choice. Run digested gDNA on 0.8% TAE gel with marker (with no ethidium bromide). Transfer Setup: 1. Remove gel ...

【目的和要求】 1.学会CTAB法提取细菌总DNA。 2.掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。 【实验原理】 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后，必须将其中蛋白质去除。CTAB（溴代十六烷基三甲胺）是一种去污剂，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中可溶并且稳定存在，若降低盐浓度，CTAB与核酸的复合物会沉淀出来，而大部分蛋白和多糖仍溶于溶液中。 DNA的电泳 ...