DNA实验技术

（1）诊断技术分类 1)根据目的基因是否被放大分类可分为杂交法和扩增法。前者被检测的目的基因不被放大，如分支链DNA技术，但用杂交法可以进一步检测经过放大了的基因片段，如PCR产物杂交分析；后者包括PCR及连接酶链反应，Qβ复制酶系统等。 2)根据被测基因的核酸类型分类①在杂交法中，Southern印迹用于检测DNA；Northern印迹用于检测RNA；斑点印迹或称 ...

EST电子延伸系统主要包括以下几个部分组成：预处理(pre-processing)、聚类(clustering)、拼接(assembly)和分析(analysis)。一、预处理Ø用crossmatch程序，去除载体序列（载体序列库：ftp://ncbi.nlm.nih.gov/repository/vector）。 处理时应注意的问题： 1、如果是用自已 ...

来自加拿大多伦多大学，多伦多成瘾与心理卫生研究中心，以及瑞士，澳大利亚的研究者在最新一期的Nature Genetics发表研究成果，该研究文章在遗传学方面提出了新的问题，质疑DNA作为唯一遗传物质的学说。一直以来，经典的遗传学说认为DNA是遗传信息的载体，人类所有的信息都存在于这个小小的染色体上。从父母亲那遗传来的形状取决于DNA序列。文章作者Art Petronis教授否定了这一论断，他认为D ...

来自加州理工大学，NanoString Technologies公司，系统生物学研究院ISB，华盛顿大学以及英国伦敦学院等处的研究人员公布了一项新的研究成果：一种新型基因表达系统，这一系统原理基于彩色编码（color-coded，注）基因转录的数据检测，灵敏度比芯片更高（与实时PCR相近），能直接检测mRNA的表达水平，并且这一过程不需要酶学反应。这一研究成果公布在《Nature Biotechn ...

Promega Wizard SV Gel and PCR Clean-up System品牌：Promega回收范围：100bp-10kb价格：（50次杭州的试剂杭州报价为562元，11元/次） Promega的产品在进口品牌中一向以价格可亲而著称。这个胶回收试剂盒也不例外。并且这个试剂盒的性能参数好得令人刮目相看！首先是100bp�10kb的回收率高达80%�95%（用于PCR产物回 ...

20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代，1973年冷泉港实验室的Joseph Sambrook和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA和EB染料观测DNA相结合的技术。现在，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法： 1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带 ...

MinElute Gel Extraction Kit 品牌：Qiagen回收范围：70bp-4kb价格：（50包装1485，约29元/反应）特点：洗涤体积只要10ul，回收产物浓度高，方便后继实验 使用方便快捷（wash-and-spin) 高回收率 回收产物纯度高，可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注射、体外转录等后继实验使用心得： 如果要回收片断量本来 ...

Chromatin Immunoprecipitation Protocols. ChIP assay. Protocols and Methods for chromatin IP.CHROMATIN IMMUNOPRECIPITATION (CHIP) PROTOCOL FOR YEAST PDF - http://research.stowers-institute.org/jeg/200 ...

一、 材料　　不同来源的DNA(50ng/ul)。 二、设备 　　PCR仪，PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管，电泳装置。 三、试剂 　　1、随机引物(10mer) (5umol/L)：购买成品。 　　2、Taq酶：购买成品。 　　3、10xPCR 缓冲液：配方见第八章。　　4、MgCl2 ：25mmol/L。 　　5、dNTP：每种2.5mmol/L。 四、操作步骤： 　　1. 在 ...

The ChIP (chromatin immunoprecipitation) method has emerged as a very powerful tool to study in vivo protein-DNA interactions. It has been applied to the dynamics of chromatin structure regulation by ...

在基因表达研究中，研究者比较注意选择合适的表达载体和宿主系统，而往往忽视基因本身是否与载体和宿主系统为最佳匹配这样一个实质性问题。基因的最佳化表达可以通过对基因的重新设计和合成来实现，如消除稀有密码子而利用最佳化密码子，二级结构最小化，调整GC含量等。以下就密码子最佳化、翻译终止效率和真核细胞中异源蛋白表达的问题加以说明。密码子最佳化（codon optimization） 遗传密码 ...

限制性内切酶可特异地结合于一段被称为限制酶识别序列的DNA序列位点上并在此切割双链DNA。绝大多数限制性内切酶识别长度为4、5或6个核苷酸且呈二重对称的特异序列，切割位点相对于二重对称轴的位置因酶而异。一些酶恰在对称轴处同时切割DNA双链而产生带平端的DNA片段，另一些酶则在对称轴两侧相对的位置上分别切断两条链，产生带有单链突出端（即粘端）的DNA片段。1个单位限制性内切酶是指在最适条件下，在50 ...

The overall sequence of events is: • Titer and plate out phage • Lift plaques onto filters and prepare them for screening • Make a probe • Hybridize the probe to the filters • Wash the filters and exp ...

Choice of bacterial strain: The bacterial E. coli strains we use when plating out cDNA and genomic libraries are normally LE392 and NM538 but some times we also use XL1-blue cells. Streak out bacteria ...

PCR克隆主要有TA克隆法 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一 ...

Introduction This manual is a compilation of many of the everyday methods used in the average molecular biology laboratory with emphasis on the techniques for large scale DNA sequencing protocols and ...

I. Useful Values 1 mg/ml tubulin = 10 µM (assuming MW of ab-tubulin heterodimer is 100000; in reality it is ~110000 but almost all tubulin labs use this convenient conversion relationship) 1 µm of a m ...

　　一、概述： 　　Promega公司的SILVER SEQUENCETM DNA测序系统是一种无放射性的序列分析系统，它通过灵敏的银染方法检测凝胶中的条带。 银染提供了一种对于放射性或荧光法来说更加快速，廉价的替代方法。测序结果可以在同一天内得到；电泳完成后经90分钟就可读序，这是常规的放射性测序法做不到的。 此外 SILVER SEQUENCETM系统用未修饰的5'OH寡聚核苷酸作为引物， 减 ...

I'm trying to do a southern blot and I have a trouble the bands I get are the same bands that appear in the genomic DNA digestion my probe is specific and it works in northern blot.Thanks -PPlopez- ...

实验目的 将复杂的细胞分子混合物加入有机溶媒萃取以除去蛋白质及其它成分，就可以纯化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白质变性(denaturaion)的特性来进行萃取的步骤，DNA和RNA不溶于有机溶媒中，而溶于水层。另外，分子选殖(molecular cloning)常利用洋菜胶(agarose)来分离不同大小的DNA片段或用以纯化DNA。 核酸定量可利用核酸会 ...