DNA实验技术

简介： RNA酶保护试验(RNase Protection Assay，RPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。 1. 原理：双链RNA（杂交的）能够抵抗RNA酶的降解。 2. 应用：检测RNA表达 3. 与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： （1） ...

一、RNA酶A的小鼠细胞治疗介绍 RNA酶A透其次是免疫细胞治疗是一种方法，它允许显示的本地化涉及到细胞的蛋白质的RNA酶敏感的结构。这项技术是高度依赖所使用的RNA酶A的质量在我们的实验室中，我们用RNA酶A的小鼠细胞治疗表明，异染色质蛋白1（HP1）在臂间异染色质蛋白的富集取决于存在一种RNA成分。 二、材料与试剂 CSK缓冲液：（在-20°C贮存 ...

一、RNA酶保护试验（RPA） RNA酶保护试验（（RNase Protection Assay，RPA）即糖核酸酶保护实验（Ribonuclease protection assay，RPA）是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。本文主要介绍了核糖核酸酶保护分析实验的从试剂准备到、操作步骤以及实验结果全部的操作流程，供大家分享。 二、材料准备及操作步骤 ...

RNA的免疫共沉淀分离及检测 非编码RNA的发现使得RNA领域再次成为了生命科学研究关注的焦点。因为RNA是一种不稳定的生物大分子，绝大多数的RNA都需要与特定的RNA结合蛋白质结合形成RNA/蛋白复合物才能稳定存在于细胞中；不仅如此，RNA与RNA结合蛋白之间的动态关联贯穿和伴随了RNA的转录合成、加工和修饰、胞内运输和定位、功能发挥及降解的整个生命循环。鉴于此，利用RNA结合蛋 ...

一、文献 1. Chen H.H. J. Lebon and A.D. Riggs Analysis of RNA structure and RNA-protein interactions in mammalian cells by use of terminal transferase-dependent PCR. Methods Mol Biol 2008. 488: p. 319-41 ...

1. miRNA是什么？具有什么作用？ 答：microRNAs（miRNA）是一种内源性非编码小分子RNA，一般具有18到25个核苷酸，其序列在进化上高度保守，通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。 miRNA是越来越受关注的转录后调控网络（post-transcriptional control）中重要的调控因子。首先，miRNA结合到核糖核蛋白（Ribonucleoprotein ...

一、RIP技术简介 由于miRNA被发现在癌症机理中起重要的作用，尤其是与肿瘤转移相关联，因此对于miRNA的研究来说，最让人兴奋的是有希望应有于癌症治疗中的RNA 抑制疗法或模拟miRNA表达疗法，尤其是对于出现肿瘤转移的癌症病人的治疗。 但是miRNA具有成百上千个靶标，所以要完全理解一个miRNA和靶标的特异性反应与肿瘤发生之间的联系，是一项非常具有挑战性的工作，尤其是在癌症研究中鉴别 ...

一、RNA蛋白免疫沉淀技术简介 RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的 ...

一、GUS报告基因的定性检测 GUS能与显色底物X-gluc 反应，显现蓝色，因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS 染色的稳定性好，组织定位精确，成为在植物中运用很广的报道基因。 1. GUS染色底物的配制 按下表1配制GUS染色的底物。 表1. GUS染色底物的配制 试剂名称 母液浓度 母 ...

前言 日本和光纯药株式会社于2009年正式将免疫印迹高灵敏度发光试剂ImmunoStar®LD（code NO.290-69904等）投放市场。这种试剂的发光底物，使用了鲁米的诺衍生物L-012（8-Amino-5-chloro-7-phenylpyrido 4-d pyridazine-14-（2H 3H ） dione Sodium Salt）。L-012与鲁米诺相比，发光信号更 ...

microRNA是一类约22nt的小分子RNA，调控基因表达。目前有研究显示，microRNA能以沉默复合体的形式稳定存在于人类的血清血浆中。癌症患者由于细胞破损，会释放一部分癌症特异的microRNA进入循环系统中，这部分microRNA就能作为生物标志物进行肿瘤的早期诊断。 安捷伦是国际领先的生物芯片制造企业。它生产的microRNA芯片通过独特的探针设计能区分成熟miRNA和 ...

生物技术的发展日新月异，随着PCR技术在各个领域的应用，包括医学方面疾病检测、农业方面转基因检测以及其他很多方面的应用等，高通量的样本核酸提取已经变得极为迫切，很多公司推出了全自动核酸提取的仪器，各种原理的都有，乱花渐欲迷人眼，有中看不中用的，贵还不好用的，如何选择一款合适的核酸自动提取仪，就得细细分析，免得花了冤枉钱，整一堆摆设回来。 从提取原理上来看，有离心柱法、磁珠法；离心柱 ...

流式细胞仪(FCM)是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。 活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验 ...

甲基化是目前的研究热点，就我所做的一点工作并其中一点心得，与大家分享。希望能够对大家有所帮助。 第一部分 基因组DNA的提取。 这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA应该是完整的。 此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提 ...

神经干细胞（NSCS）是指一类具有多分化潜能（能分化为神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞），能自我更新和克隆性增殖的一群细胞。在NSCS移植研究中，有必要对NSCS进行示踪标记，以便实时跟踪和区分植入的NSCS和宿主细胞。绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因是一种新的报告基因，其表达产物GFP可在紫外光或蓝色光激发下稳定地发出绿色荧光，不需要任何底物或 ...

概述 cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板，逆转录形成的互补DNA（cDNA）与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中，在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因，因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。 cDNA文库显然比基因组 ...

膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一，主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动，主要受脂质双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性，不饱和键的存在会降低膜脂分子间排列的有序性，从而增加膜的流动性，短链能减低脂肪酸链尾部相互作用，在相变温度下， ...

肝癌（Hepatocellular Carcinoma HCC）是一种严重威胁人们健康的恶性肿瘤，每年约有70万患者死于肝癌。在中国，肝癌每年发病人数超过25万人，其发病主要与乙肝病毒感染、酒精肝、食物受黄曲霉毒素污染等原因有关。肝癌的高致死率主要是由于其具有很强的侵润和转移能力，特别是常常侵入肝内血管，形成肝内转移，病理学特征是门静脉癌栓（portal vein tumor thrombosi ...

1．目的 学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。 2．原理 利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片断的克隆菌落。 3．器材 旋涡混合器，小镊子，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，超净工作台，酒精灯，无菌 ...

1、接种细胞：收集对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200?l. 2、培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。 3、呈色：培养试验设定时间后，每孔加含20?l MTT 溶液（5mg/ml)的培养液200?l，继续培养1-4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要 ...