DNA实验技术

相关专题 核糖核酸酶保护实验 RNA酶保护试验实际上是很早就出现的技术。在1982年出版的第一版圣经(分子克隆)还没有提到。在1989年出版的第二版中已经出现：7.71 Mapping of RNA with Ribonuclease and Radiolabeled RNA(可参见中译本P383-387)。在2001年出版的第三版中的第七章 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 核糖核酸酶是催化RNA水解、作用于RNA中的3′，5′-磷酸二酯键的内切酶，分别生成5′-磷酸核苷和3′-磷酸核苷。 核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶 ...

相关专题 DNA连接与转化 氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10 ...

相关专题 基因芯片是目前常用的一种基因检测方法。基因芯片又称DNA芯片，它的测序原理是通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的杂交测序方法。 基因芯片是在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针，当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置， ...

相关专题 什么是DNA甲基化，本文叙述了DNA甲基化结构基因，DNA 甲基转移酶，DNA 去甲基化，甲基化新位点。DNA甲基化是甲基转移酶催化作用下，DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶。DNA甲基化修饰可导致基因结构和功能的异常。 结构基因 DNA甲基化状态的改变可导致基因结构和功能异常。结构基因含有很多C ...

相关专题 DNA(Deoxyribonucleic acid)即脱氧核糖核酸，是组成基因的材料，也是染色体的主要组成成分之一。发现DNA结构是科学史划时代的成就，但发现它的方法是模型建构法，模型建构法正如小朋友拼图游戏一样的“拼凑”法。通过氢键形成的碱基对和基对之间的相互作用力保证了DNA分子的双螺旋结构是相对稳定的。 DNA结构 — 概述 ...

相关专题 DNA序列分析主要测定的是组成DNA的核苷酸序列（DNA的一级结构），核酸的核苷酸序列测定依据方法有两种：一、Sanger双脱氧链终止法原理和Maxam Gilbert DNA化学降解法原理。本文叙述了两种测序方法的基本步骤和DNA序列分析的主要内容。 DNA序列分析的方法 DNA的一级结构决定了基因的功能，欲想解释基因的生物学含 ...

相关专题 解读miRNA （MicroRNA） 2000年，RNA的研究进展被美国《科学》杂志评为重大科技突破;2001年“RNA干扰”作为当年最重要的科学研究成果之一，再次入选“十大科技突破”;2002年12月20日，Science杂志将“Small RNA & RNAi”评为2002年度最耀眼的明星。同时， Nature杂志亦将Small ...

相关专题 DNase I可以将DNA链消化成寡脱氧核苷酸，因此常常用于RNA提取过程中消化掉提取核酸中所残留的DNA成分而得到高纯度的RNA产物。 DNase I，即Deoxyribonuclease I，中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单 ...

相关专题 DNA测序技术始于70年代末，FrederickSanger最先发明了手动双脱氧终止法测序技术。80年代中期首次出现自动测序仪，其原理还是采用双脱氧终止法的方法，并利用荧光标记代替同位素标记。 DNA测序仪目前主要供研究之用，是生物学家们所能购买的最昂贵仪器之一，然而，在美国政府削减研究经费且未来的经费前景也不容乐观之际，许多研究 ...

相关专题 无论是真核还是原核生物，其遗传物质的复制都是有起始部位的，这个起始位置我们常常成为DNA复制起始子，在DNA复制的起始部位常常是含有AT序列，起始子的结构大多呈现十字形。 很多实验都证明：复制是从DNA分子上的特定部位开始的，这一部位叫做复制起始点(originof replication)常用ori或o表示。细胞中的DNA复制一 ...

相关专题 PCR(聚合酶链式反应)反应包括三个基本步骤，即：模板DNA的变性、模板DNA与引物的退火复性、引物的延伸。PCR反应体系包括5种基本成分，依次为：引物、DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、Mg2+。 1、引物 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序 ...

相关专题 近几年来RNA干扰技术取得了突破性进展，有关RNAi的学术报道呈现爆炸式增长趋势，RNAi中出现一些名词概念相近但不完全一致，本文列举了miRNA、dsRNA、shRNA以及siRNA概念的简单解释。 RNA干扰(RNAi)，即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地 ...

相关专题 NCBI-做到最全最强大 可借此问题介绍3个主要的基因组浏览器。将利用所有3个站点对基因ADAM2进行检测，使读者能对每个站点提供的信息之间的细微的区别有一个正确的认识。 1.国立生物技术信息中心(NCBI)图谱浏览器(Map Viewer)可以通过NCBI主页进入NCBI的人类图谱浏览器，网址为http://www.ncbi.nl ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 DNA连接就是DNA分子的体外连接在一定条件下 由DNA连接酶催化两个双链DNA片段组邻的5’端磷酸与3’端羟基之间形成磷酸酸脂键的生物化学过程 DNA分子的连接是在酶切反应获得同种酶互补序列基础上进行的. 带有相同末端(平端或粘端)的外源DNA必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中但是在连接反应时外源DNA和 ...

相关专题 基因工程实验中目的基因与载体经过PCR扩增后都要进行回收以后才能进行后续工作，而胶回收的目的基因与载体的浓度高低，对后续的链接起到至关重要的作用，因此DNA回收是基因工程中比较重要的步骤，文中即介绍一种从凝胶中回收DNA的操作步骤及胶回收过程中可能遇到的问题。 一、酶切 1、原理 限制性内切酶是分子操作中重要的工具酶，是一类能够识 ...

相关专题 cDNA合成时，合成第一链目前主要有三种方法。而且每一种方法之间存在着差异性，这些相对的特异性使得所得到的cDNA的数量和种类有所不同。这篇文章为大家介绍随机引物法的优劣势和特性。 随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5"末端序列及从带有二级结构区域 ...

相关专题 NCBI-做到最全最强大 举例说明如下。一个mRNA片段在基因库的登录号为BG334944。首先，登录http://www.NCBI.nlm.nih.gov/Entrez/，在NCBI的Entrez界面找到这个EST的核苷酸序列。在页面上部的对话框中键入登录号BG334944，下拉菜单中选择Nucleotide，点击Go。结果页面显 ...

相关专题 蛋白纯化技术专题 DTT( 二硫苏糖醇)是实验室常用的还原试剂，常被用于蛋白质保存以及蛋白二硫键的还原。DTT的入特点是极易被氧化，稳定性较差，一般DTT常保存于-20度中可以长达数年。 DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。 DTT特 ...

相关专题 PCR实验中常遇见一些令人头疼的小问题，可能就是实验设计或者实验过程中一个小小的条件没有到位，就导致预期的实验结果出不来。下面，我们就来用一个典型的例子，看一看PCR过程中常见的问题之一：pcr扩不出条带。 例：首先从乳腺癌细胞MCF-7提取RNA，反转cDNA(09年9月)，-20保存。现在以此cDNA作为模板，扩增雌激素受体基 ...