DNA实验技术

相关专题 20世纪已经结束，回顾20世纪的科学发展史，不难看出，上半个世纪，科学发展主要在物理学，爱因斯坦的相对论将现代物理学推到了光辉的顶峰;但在下半个世纪，科学的重心显然偏向生命科学。自1953年，克里克和沃森发现DNA 双螺旋结构以来，生命科学成果迭出。截止1989年，已有22位科学家共9 次在此领域获得诺贝尔奖。1989年～1997 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 Clontech，曾经是华人的骄傲，其开发的产品曾多次获得R&D 100大奖。虽说几经沉浮，但如今Takara旗下的Clontech仍在基因表达领域默默耕耘，不断开发新产品。对于从事基因表达的研究人员来说，Smart Race、酵母双杂交系统、慢病毒与腺病毒载体、多色荧光蛋白载体这些产品大家都不会陌生。近几年 ...

相关专题 引物设计操作流程：序列下载——同源性比较——引物设计筛选 1.序列查找 根据所需检测的病原体或者待检特定基因，在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/网址查询有关序列。 2、同源性比较 主要有两种方法 A、在www.NCBI.nlm.nih.gov/Blast/blast.cgi 网址进行在线的两两比较。 B、采 ...

相关专题 引物设计 Primer-Blast介绍 Primer-BLAST，在线设计用于聚合酶链反应(PCR)的特异性寡核苷酸引物。Primer-BLAST可以直接从Blast主页(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)找到，或是直接用下面的链接进入： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools ...

相关专题 引物设计 知道了基因名(即Symbol)，怎样在NCBI上查找该基因的序列。Symbol是基因的名称，在文献是可以经常看到的，经常会提到某个基因的基因名。我们就可以用Symbol在NCBI的Gene数据库搜索。但有一点需注意，Symbol是经常会改变的，就是说随着序列的升级，对该基因的研究更加深入，Symbol会改变。但这个基本上不 ...

相关专题 引物设计 测定了引物的OD值后发现A260/A280 由于核酸在260nm附近有强吸收，而蛋白质在280nm附近有强吸收，从生物体内提取核酸时，常用A260/A280比值来评价核酸纯度(比值在1.8～2.0之间)，这一判断是基于序列中A、G、C、T所占比例大致相同时的结果。而合成的DNA/RNA则不同，序列很短 (通常在20～30个 ...

相关专题 引物设计 合成的引物进行PCR反应时无目的条带，怎么办? PCR反应失败的原因很多，可以从以下几个方面考虑。 1) 引物和模板是否配对，同源性有多大? 2) 引物本身是否有立体结构. 3) PCR反应用试剂是否能正常工作? 4) PCR仪是否工作正常? 5) PCR反应条件是否合适? 如果一切正常，还无法解决问题时，我们可以免费重新 ...

相关专题 引物设计 如何根据引物来反查DNA序列 可以上NCBI用BLAST对引物进行比对，会给出你引物所在的DNA序列。 1.登陆NCBI网站 2.在上排找到BLAST点击进入我只用过Old blast你可以点击Old blast的连接进入。 3.找到Search for short nearly exact matches，点击进入。 4 ...

相关专题 引物设计 电泳中的引物问题 1) 使用3%的Agarose凝胶电泳分析合成的引物，发现有很多条泳带，为什么? 对引物进行电泳一定要使用变性PAGE电泳。由于引物是单链DNA，容易形成复杂的立体结构，因此进行Agarose电泳时，容易出现多条泳带，更无法用Agarose电泳进行定量了。 2)能否根据引物电泳后EB染色后条带的亮度对合成 ...

相关专题 DNA连接与转化 实验目的： 1.掌握限制性核酸内切酶消化DNA的原理。 2.掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。 3.掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。 基本原理 限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶(水解磷酸二酯键)。根据酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大类。通常所指的 ...

相关专题 RNA干扰技术 RNAi实验设计的常见问题及其解答 如何检测荧光标记的siRNA? 荧光标记双链是最常用的优化转染条件的方法。可以用流式细胞仪或者荧光共聚焦显微镜检测标记的siRNA。但是如果siRNA没有针对特定的抗核酸酶进行修饰，荧光可能不会反映siRNA的基因沉默效率。 如何分析带有二级结构的RNA寡核苷酸链? 在90℃下加热 ...

相关专题 RNA干扰技术 几十年来生物学上最重要的进展，也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA干涉(RNAi)是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象，是在线虫中发现的，在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。 此后，科学家们明白，RNAi还有其他形式，它既是一种了解基因功能的强大工具，又是很多生物的基因组所采用的一种在演化 ...

相关专题 RNA干扰技术 RNAi实验中双链短RNA(dsRNA)制备过程，本实验方法来自于加州大学Jim教授实验的，很权威。 Procedure for the Generation of dsRNA for use in RNAi 1. Design polymerase chain reaction (PCR) primers that ...

相关专题 RNA干扰技术 由于在一些生物中RNAi的影响格外显著，有人提出在RNAi 途径中可能存在某个(信号)扩增的步骤。这种扩增可能是复制外源注入的dsRNA从而产生更多的siRNA ，也可能是直接扩增siRNA本身。这种扩增可能在RNA诱导沉默复合物(RISC)形成过程进行，作为RISC形成的补充，或者独立于RISC 。 在线虫中，较少 ...

相关专题 RNA干扰技术 RNAi所产生的基因沉默具有如下特点： 1)高效性。Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的，只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大，只有当浓度降低到0.05 nmol/L时，沉默的效果才消 ...

相关专题 RNA干扰技术 RNAi的生物学功能 从低等的真菌到高等的哺乳动物都有RNAi，在不同的物种间既有差异，又有很高的保守性，这说明RNAi应该出现在生命出现的早期，它的存在是生物进化与发育的重要组成部分。目前来看，RNAi的生物学功能主要表现在如下3个方面： 1)一种抗病毒的应答反应。真核生物也编码类似RdRPs的酶，它们与病毒的Rd ...

相关专题 RNA干扰技术 首次发现dsRNA能够导致基因沉默的线索来源于线虫Caenorhabditis elegans的研究。 lang=EN-US1995年，康乃尔大学的Su Guo博士和 lang=EN-USKemphues在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时，发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义R ...

相关专题 选择BLOCK-iT™ Dicer RNAi试剂盒，利用RNA干扰技术(RNA interference，RNAi)进行简单、快速的基因阻断，您不必再花费时间设计siRNA oligo序列及检测它们的效率，就可直接获得RANi结果。 功能基因阻断研究的简单、快速的方法 RNA干扰(RNAi)正在成为一种最受欢迎的技术之一，用于在功 ...

相关专题 Long double-stranded RNAs (dsRNAs; typically 200 nt) can be used to silence the expression of target genes in a variety of organisms and cell types (e.g. worms fruit ...

相关专题 There are several approaches that can be used to determine where specific microRNAs are expressed in a given tissue. Northern blots microRNA microarrays and in situ m ...