DNA实验技术

一、酸杂交技术检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度，在复杂的物体中，使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性，核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年，目前研究实验室用得多，临床实验室用得较少，除成本高外，关键是操作复杂，重复性差，仅能半定量。成本高可随经济发展而缓和，但其它缺点尚需努力克服。杂交实验的探针应具有特 ...

从化学和生物学的意义上理解，探针是一种已知特异性的分子，它带有合适的标记物供反应后检测。探针和靶的相互反应如抗原-抗体、血凝素-碳水化合物、亲合素-生物素、受体和配体，以及核酸与其互补核酸间的杂交等反应均属此类。用核酸探针与待检标本中核酸杂交，形成杂交体，再用呈色反应显示。此方法用于疾病的诊断，称为分子杂交基因诊断。此法开始用于遗传性疾病的诊断如血红蛋白病的诊断、先天性遗传病的产前诊断。近来，已发 ...

分装ELISA试剂盒货号品名规格价格备注F0001人血管紧张素转化酶(Human ACE)48T/96T2000/3000进口分装F0002激活素A(Activin A)48T/96T2000/3000进口分装F0003★人脂联素(human Adiponectin)48T/96T1500/2500进口分装F0004白细胞活化黏附因子(ALCAM)48T/96T2000/3000进口分装F0005 ...

1) Transfect cells.2) Culture cells 1-3 passages in a T-75 flask containing selection material (e.g. hygromycin neomycin etc)3) Pellet cells and resuspend at a concentration of 1 x 105 cells/ml in sel ...

蛋白印迹(Western Blot)常用试剂蛋白抽提货号品名规格价格备注WB003组织蛋白抽提试剂100ml300全蛋白抽提WB004RIPA裂解液100ml100全蛋白抽提WB005细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂100次680　WB006膜蛋白和胞质蛋白抽提试剂100次680　WB007改良Western及IP细胞裂解液100ml320　WB008蛋白酶抑制剂混合物(20X)1ml200　WB0 ...

一、实验目的 观察分析植物细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征，学习染色体组型分析的方法。了解和掌握不同物种染色体组型和带型分析的方法和技术，进一步鉴别染色体结构和染色体组。要求至少利用一种方法制备出一个物种的合格的染色体标本，进行组型分析或进行不同的带型，如G-带、C-带等分析。练习显微摄影的操作过程，拍摄和印放显微照片。二、实验条件本实验在遗传学实验室完成。遗传学实验室提供： 1 ...

一、样品的浓缩　　生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀，为了保存和鉴定的目的，往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的： 1、减压加温蒸发浓缩　　通过降低液面压力使液体沸点降低，减压的真空度愈高，液体沸点降得愈低，蒸发愈快，此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。 2、空气流动蒸发浓缩 空气的流动可使液体加速蒸发铺成薄层的溶液，表面不断通过空气流；或将生物大分 ...

在某些情况（例如用寡核苷酸作Southern印迹杂交的探针）下，重要的是要将寡核苷酸标记至尽可能高的放射性比活度。磷酸化反应最多能使每一寡核苷酸分子中掺入一个32P原子。但用大肠杆菌DNA聚合酶IKlenow片段3合成与合成寡核苷酸互补的DNA链， 则可得到比活度更高探针（Studencki 和Wallace，1984;Ullrich等，1984b）。用一短引物与寡核苷酸模板结合，后者的序列互补于 ...

　电泳完毕后，可立即将乙醛酰RNA自琼脂糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜，有以下几种转移方法：毛细管洗脱法、真空转移法和电印迹法。毛细管洗脱法如下所述， 真空转移法和印迹法则按有关仪器生产厂家产品说明书进行。尽管有人认为在转移前对琼脂糖凝胶进行预处理实属不必（Thomas，1980）甚至有害（Thomas，1983），但我们认为含甲醛的凝胶必须用经DEPC处理的水淋洗数次，除去甲醛。 如果琼脂糖中浓度大 ...

合成的寡核苷酸在合成时其5'端缺少一个磷酸基， 因而极易用T4噬菌体多核苷酸化反应，这种探针可达到于γ＝32P从γ＝32PATP本身同样高的放射比活度。下面所述的反应是为对10pmol寡核苷酸进行高比活度的标记而设计的。通过扩大或缩小这一反应的规模便可成功地标记不同量的寡核苷酸，而各成分的浓度则可保持不变。 1）配制下列反应混合液：寡核苷酸（10pmol/μl） 1.0μl10xT4噬菌体多 ...

１．带有非互补突出端的片段　　用两种不同的限制酶进行消化可以产生带有非互补突出端的片段，刀就是最容蜴 克隆的片段。常用的大多数质粒载体均带有由几个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点。由于现有的多克隆位点如此多样，因而几乎总是能找到一种带有与外ＤＮＡ片段未匹配的限制切位点的载体。于是，采用所谓的定向克隆即可将外源ＤＮＡ片段插入到载体当中。例如：载体pUC19用BamHl和Hind－Ⅲ进行消化，然后 ...

当ＲＮＡ自琼糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜之前，溴化乙锭的染色时间一般不宜过长，这是因为被染料饱和的核酸分子，其转移效率有所降低。然而，用溴化乙锭作短暂染色，既不至于对核酸转移过程产生可以察觉的掏作用，又独具同时检测凝胶和凝膜上的ＲＮＡ的优点。１．方法Ｉ １）电泳结束后，含乙二醛－ＤＭＳＯ的凝胶应浸入含溴化乙锭（0.5 μg/ml）的10mmol/L磷酸钠（pH7.0）溶液。甲醛凝胶需用无Ｒ ...

　如今，质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源ＤＮＡ片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可比拟的优点，也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源ＤＮＡ。另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别不同的六核苷酸的限制酶BamHl和BglⅡ产生具有相同突出末端的限制酶切片段，这样用BglⅡ消化而制备的外源ＤＮＡ片段可以 ...

IntroductionThe following protocol describes a procedure for the purification and cloning of miRNAs and other small RNAs in the 20-30 nucleotide size range from plant tissue. Figure 1 gives an overvi ...

1. 引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种 主要都是由ABI/PE 公司生产，而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪，可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。 亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定 ...

1、目的基因的获取： （1）特定细胞表达的目的基因：提取RNA后进行反转录，PCR扩增；（2）载体中含有的目的基因：酶切或PCR获取；（3）融合蛋白基因：根据需求，进行PCR合成目的基因；2、穿梭质粒的构建：（1）携带目的基因的穿梭质粒的构建：通过酶切、连接的方式得到，一般采用的是pShuttle-cmv载体；（2）携带多个目的基因的穿梭质粒的构建：如同时表达两个目的基因，可通过IRES将两个 ...

SUPER Green Ⅰ（10000× DMSO溶液，电泳级） SUPER Green Ⅰ核酸染料特点 ● 无毒性：属花箐类染料，容易生物降解，无致癌毒性。● 灵敏度高：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25～100倍。 ● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。 ● 操作简单：无须脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。● 适用范围广：可适用于多种凝胶电 ...

（1）原理慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构，但也有不同于逆转录病毒的组份和特性，作为基因治疗载体发展起来，最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试 ...

（1）原理腺病毒（adenovirus，AV）是一种没有包膜的线状双链DNA，它能感染分裂细胞和非分裂细胞，在核内以神经元细胞的形式复制，存在多种AV血清型。到目前为止，构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方法取代E1或E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制，因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力（尤其是 ...

Day 1 Plating (9-10am)Plate 2-2.5x106 of 293T cells per 10cm plate Day 2 Transfection (9-10am)Prepare calcium-phosphate precipitate (1ml/10cm plate) Transfer vector - 20µg Packaging plasmid - 15µg (3r ...