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        🔥 细胞辐照培养

        相关实验:🔥 细胞辐照培养

        最新修订时间:

        丁香实验推荐阅读

        合作专家 | 雷庆强硕士

        免疫学 四川大学

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        审核专家 | 王蕾博士

        生物化学分子生物 浙江大学

        简介

        细胞辐照指的是用 X 射线,B、y 射线等电离射线来辐射细胞的过程。

        原理

        辐照形成带电荷的颗粒或离子改变了 DNA 从而使淋巴细胞失去增殖能力,但仍具有刺激能力。

        用途

        细胞辐照会延长细胞周期,诱导染色体畸变,从而使组织、细胞受到损伤对于部分增殖过快的细胞,辐照可延缓其增殖速度。

        材料与仪器

        细胞培养皿、移液枪、移液管

        胎牛血清(FBS)、1640 培养基、辐照仪

        步骤

        1. 细胞培养

        1)从液氮罐拿出保种细胞,迅速放到 37 ℃ 水浴锅中,不停轻轻摇动加速细胞溶解。

        2)将细胞悬液与 5 mL 配好的培养基在 15 mL 离心管中混匀,1200 rpm,离心 3 mins。

        3)弃上清,使用 10 mL 培养基将细胞团块重悬,加入 10 cm 细胞培养皿,放入 37 ℃ 恒温培养箱中培养。

        2. 待细胞状态良好时,根据实验要求,进行不同剂量的细胞辐照。

        辐照仪房间有两个空调,大家在使用前需要打开两个空调,温度已经是设定好了的,只需要打开遥控器即可;辐照仪旁边有一个除湿仪,大家在使用前需要先查看一下除湿仪,如果显示水满需要将水倒掉(辐照仪房间对面那间房间有水槽可以用来倒水)。

        1)将钥匙插入,待仪器开机,屏幕显示如图 1 界面,点击 WARM UP,出现图 2 界面,点击 STRART,机器开始预热,大概需要 20 min;

        🔥 细胞辐照培养

        2)预热结束后,出现图 3 界面,点击 MAIN,出现图 4 界面,点击 MANUAL,出现图 5 界面,电压跟电流的参数为固定值,无需更改,只需要将实验所需要的时间更改即可,时间的单位为秒,点击 START 开始辐照。

        🔥 细胞辐照培养

        3. 辐照完成后的细胞,继续放入 37 ℃恒温培养箱中培养。

        注意事项

        1. 辐照仪里面顶部有卡槽,用来放铜板,总共有三块铜板,可根据辐照需求自行选择;

        2. 在辐照时,要确定门关好,状态为门把手处于竖直状态,如图 6 所示,预热时同样如此,如果门没关好进行预热或辐照操作,机器会显示程序错误;

        3. 机器在当天最后一个人使用完后要等机器散热结束关机,将钥匙自行归还。钥匙一般放在 234 房间进门右手边靠近柜子的那一列抽屉的第三个抽屉里;

        4. 辐照仪里面共有 5 个 level,一般辐照小鼠在 level 1,加三个铜板,不加反射体(就是那个很沉的黑框),根据辐照剂量计算所需要的辐照时间;辐照细胞一般在 level 3,加一个铜板或者不加铜板,根据辐照剂量计算所需要的辐照时间。

        常见问题

        1. 辐照后细胞大量死亡,说明辐射太强;

        2. 设置好对照组,射线强度梯度。

        来源:丁香实验

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