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        植物组织中酷类物质含量的测定

        相关实验:植物组织中酷类物质含量的测定

        最新修订时间:

        简介

        植物组织中的酚类物质在多酚氧化酶的催化下被氧化为醍,醍可自动聚合成有 色物质,发生褐变。因此,对植物组织内酚类物质进行定量测定具有一定意义,是植物抗性生 理研究中经常用到的一个指标。本实验的目的在于学习测定酚类物质含量的原理及方法。

        原理

        酚类物质含量测定常采用 Folin-酚法。酚类物质在碱性条件下可与 Folin-酚试 剂中的磷鸨酸和磷钥酸反应生成鸨蓝和钥蓝化合物,该物质在 700 nm 处有最大光吸收,其吸 光度的大小与酚类物质的含量成正比。因此,通过测定吸光度的大小即可测定植物组织中酚 类物质的含量。

        材料与仪器

        1. 材料:各种植物组织。
        2. 试剂:
        (1)Folin-酚试剂:称取鸨酸钠 25 g 和磷铝酸 5 g, 放入回流瓶中,加 12.5 mL 磷酸和 188 mL 蒸馋水,一起回流煮沸 2 h, 冷却后用蒸僭水定容至 1 000 mL。
        (2)10% Na2CC)3:称取 10 g Na2CO3 溶于 100 mL 蒸儒水中。
        (3) 标准酚溶液:0.45 mmol - 邻苯二酚溶液。
        3. 仪器: 分光光度计,离心机,研钵,试管,试管架,移液管等。

        步骤

        1 . 酚类物质的提取:称取 1 g 植物材料,加少量水研磨成匀浆,充分洗涤研钵,定容至 100 mL。用时可适当稀释。
        2. 标准曲线的制作:按表 56」加入各种试剂,混匀,3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振 摇,室温下静置 1 h 后测定其在 700 nm 处的吸光度。以酚溶液浓度为横坐标,吸光度为纵坐 标,绘制标准曲线。
        表 56-1 标准曲线制作加样表
        试剂 试管编号
        1 2 3 4 5 6
        标准酚溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
        蒸儒水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0
        最终浓度/(卩 mol • mL-1) 0 45 90 135 180 225
        Folin-酚试剂/mL 2 2 2 2 2 2
        3. 样品酚含量的测定:将提取液适当稀释,吸取 2 mL 置于试管中,加 2 mL Folin-酚试 剂,3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振摇,室温下静置 1 h 后测定其在 700 nm 处的吸光度,在 标准曲线上查出对应的酚浓度厂
        4. 结果计算:
        c X V
        酚含量 (Mmol- g-,) = —
        式中:c 一为从标准曲线上查得的酚浓度,卩 mol・mL 1;
        V—为样品体积,mL;
        W —为样品质量»go

        注意事项

        酚类物质提取时避免被氧化。

        常见问题

        测定植物组织中酚类物质的含量有何意义?

        来源:丁香实验

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