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        家兔急性 DIC 动物模型

        相关实验:弥散性血管内凝血

        最新修订时间:

        简介

        弥散性血管内凝血,也称 DIC。目前,用于弥散性血管内凝血的教学方法主要有家兔急性 DIC 动物模型的方法。

        原理

        家兔急性 DIC 动物模型的方法的基本原理是耳缘静脉注入兔脑粉浸液,通过激活外源性凝血系统,导致 DIC 发生。

        用途

        家兔急性 DIC 动物模型法可用于探究急性 DIC 的发病机制。

        材料与仪器

        器材:

        ① 动物实验手术器械

        ② 试管架,试管

        ③ 刻度离心管,离心机

        ④ BL-420 生物机能实验系统

        ⑤ BI-2000 微循环图像分析系统

        试剂:

        ① 3% 戊巴比妥钠溶液

        ② 4% 兔脑粉生理盐水浸液

        ③ 3.8% 枸橼酸钠溶液

        步骤

        家兔急性 DIC 动物模型法的基本过程可分为如下几步:

        (一)实验组

        (1)家兔称重,仰卧位固定在兔台上。

        (2)3% 戊巴比妥钠溶液(1 mL/kg)经耳缘静脉注射行全身麻醉。

        (3)剪去颈部手术视野的被毛,常规暴露气管,插气管插管,保持呼吸通畅;分离一侧颈总动脉,插入硅胶管,作取血样本用;分离另一侧颈总动脉,行颈总动脉插管并连于压力换能器,在 BL-420 生物机能实验系统上描记血压。

        (4)在右侧腹直肌旁做长 5~8 cm 的纵向中腹部切口,钝性分离肌肉,打开腹腔后,推开大网膜,找出一段游离度较大的小肠肠袢,从腹腔中拉出,放置在 BI-2000 微循环图像分析系统连接的微循环恒温灌流槽内,使肠系膜均匀平铺在有机玻璃观察环上,压上固定板,调整灌流液液面,使其刚刚覆盖过肠系膜。

        (5)用 BI-2000 微循环图像分析系统于显微镜下观察肠系膜的正常微循环。记录正常状态下的血压。经颈动脉取血,将最先流出的数滴血弃之,然后于盛有 3.8% 枸橼酸钠溶液(0.5 mL)的离心管中放入兔血 4.5 mL,上下颠倒混匀,请勿震荡。先取 20 μL 供血小板计数用,其余血液离心 15 min(3 000 r/min),取血浆检测凝血相关指标。

        (6)取 4% 兔脑粉生理盐水浸液,按 2.0 mL/kg 计算,将总量用生理盐水稀释至 30 mL,由耳缘静脉注射(可用头皮静脉针),在 15 min 内注完。其注入速度为:第一个 5 min 以 1.0 mL/min 注入;第二个 5 min 以 2.0 mL/min 注入;最后 5 min 以 3.0 mL/min 注入。

        (7)用 BI-2000 微循环图像分析系统于显微镜 10x 物镜下动态观察肠系膜的微循环;于 40x 物镜下观察微循环中血细胞及血小板形态、血流速度、血形成、血浆外渗现象等。

        (8)分别于注射兔脑粉浸液开始后 15 min、45 min 记录血压变化,并由颈总动脉采集血样,检测血小板计数和凝血相关指标。

        (9)实验结束后处死动物,打开胸腔、腹腔,观察各脏器的变化。

        (二)对照组

        将耳缘静脉注入兔脑粉浸液改为注入等量生理盐水,注入途径、总量、速率、观察指标等均与实验组相同。

        注意事项

        (1)本实验中,兔脑粉浸液的制备及注射速度对实验成败影响较大。

        ① 兔脑粉浸液的制备:称取兔脑粉 400 mg,其活力(PT)不得大于 12 s,加入生理盐水 10 mL,充分搅匀后放入 37 ℃ 恒温水浴内孵育 60 min,每隔 15 min 充分搅拌一次,然后离心(1000 r/min)5 min,取上清液过滤后,供静脉注射用。或将兔脑凝血活酶冻干制剂稀释后静脉注入。

        ② 注入兔脑粉浸液的原则是先慢后快,切忌过快,否则极易造成动物猝死。注射过程中密切观察动物呼吸情况,必要时酌情调整注射速度。

        (2)每次采集完血样用生理盐水冲洗动脉插管(5 mL 注射器)以防管内凝血。注意不能使用抗凝剂,以免影响实验结果。

        (3)本实验中所用试剂、血浆样本及吸管较多,同一吸管只能吸取某一试剂或血浆样本,避免交叉使用。

        (4)如室温低于 20 ℃,实验用血浆应在 37 ℃ 恒温水浴中保温 1 min。

        来源:丁香实验

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