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        IRBP视网膜抗原诱导葡萄膜炎动物模型法

        相关实验:葡萄膜炎动物模型

        最新修订时间:

        简介

        取 1 mg/ml 的 IRBP 溶液与 CFA 按 1:3 比例混合,待充分混匀制成乳剂后,取 200 ul 分别免疫 B10.RⅢ小鼠双足部皮下,然后经腹腔注射 0.01 ug/ul 百日咳毒素 (pertussis toxin,PTX)100 pul。免疫后第 7 天至 28 天隔日进行临床裂隙灯显微镜眼前段检查和直接检眼镜眼底部检查,大体观察评价小鼠眼组织临床表现和炎症的严重程度。在免疫小鼠后第 8 天、14 天、21 天、28 天取小鼠眼球,固定、脱水、包埋,病理组织切片,HE 染色,评价玻璃体、脉络膜和视网膜病理组织改变。

        原理

        感染、免疫、遗传等因素是导致葡萄膜炎的最主要原因。

        葡萄膜炎的发病常与眼内视网膜抗原触发的免疫反应有关。IRBP 是存在于光感受器间基质的一种糖蛋白,具有很强的抗原性和致葡萄膜炎活性,可联合病原体引起动物机体的免疫应答,产生葡萄膜炎。

        用途

        此模型是由含病原体成分的弗氏佐剂乳化的致葡萄膜炎活性眼组织抗原诱导的葡萄膜炎动物模型,其病理组织学改变表现为:炎症浸润至玻璃体,视网膜和脉络膜,甚至损伤累及光感受器细胞层。

        由于其临床表现能模拟人类葡萄膜炎的主要特征,适合人类葡萄膜炎的发病机制研究。

        材料与仪器

        实验对象:

        小鼠。

        实验器材:

        临床裂隙灯显微镜、直接检眼镜。

        实验试剂:

        ① IRBP 溶液;

        ② CFA 弗氏完全佐剂;

        ③ 0.01 ug/ul 百日咳毒素;

        ④ HE 染色。

        步骤

        IRBP 视网膜抗原诱导葡萄膜炎动物模型法的基本过程可分为如下几步:


        A. 取 1 mg/ml 的 IRBP 溶液与 CFA 按 1:3 比例混合,待充分混匀制成乳剂后,取 200 ul 分别免疫 B10.RⅢ 小鼠双足部皮下,然后经腹腔注射 0.01 ug/ul 百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)100 pul。


        B. 免疫后第 7 天至 28 天隔日进行临床裂隙灯显微镜眼前段检查和直接检眼镜眼底部检查,大体观察评价小鼠眼组织临床表现和炎症的严重程度。


        C. 在免疫小鼠后第 8 天、14 天、21 天、28 天取小鼠眼球,固定、脱水. 包埋,病理组织切片,HE 染色,评价玻璃体、脉络膜和视网膜病理组织改变。

        注意事项

        此模型的眼部临床特点主要表现:结膜充血,角膜浑浊,前房闪辉,前房细胞、前房大量渗出以及视网膜和脉络膜的损害。HE 染色后可见视网膜结构紊乱,炎症可损伤至神经节和光感受器层,视网膜折叠,视网膜下可见炎性渗出和血管炎,局部甚至可损伤至视网膜色素上皮。免疫后第 8~9 天炎症出现,14 天时达到高峰,随后炎症迅速消退,21 天炎症明显减轻,28 天时在临床和病理上未见炎性改变。

        来源:丁香实验

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