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        流式细胞术对特定 MHC 分子进行分型

        相关实验:MHC分型实验

        最新修订时间:

        简介

        流式细胞术对特定 MHC 分子进行分型是指当实验中仅需检测特定的某一个或某两个 MHC 的特殊情况下,可以采用流式细胞仪检测特定 MHC 分子的表达的方法来进行分型。

        材料与仪器

        【器材】
         
        流式专用样品管、离心机、玻璃管、流式细胞仪;

        【试剂】

        ① 特定MHC分子特异性的单克隆抗体、荧光标记的二抗、外周血;
         
        ② 洗涤buffer(含2.5%FBS的PBS,FACS buffer);
         
        ③ 重悬buffer(2.5%FBS、1%多聚甲醛的PBS)

        步骤

        流式细胞术对特定 MHC 分子进行分型的基本过程可分为如下几步:
         
        ① 取外周血,分离 PBMC。
         
        ② 用 4 ℃ 含 2.5% FBS 的 PBS 洗涤 2 次后,加入特定 MHC 分子特异性的单克隆抗体 100 μl。轻轻混匀后,冰上孵育 20~40 分钟。
         
        ③ 用 4 ℃ 含 2.5% FBS 的 PBS 洗涤 2 次后,加入 100 μl 1:50 或 1:100 稀释后的荧光素标记的二抗。轻轻混匀后,冰上孵育 20~40 分钟。
         
        ④ 用 4 ℃ 含 2.5% FBS 的 PBS 或 FACS buffer 洗涤 2 次后,用 4 ℃ 含 2.5% FBS、1% 多聚甲醛的 PBS 重悬细胞,流式细胞仪 488 nm 测定平均荧光强度和阳性率。

        来源:丁香实验

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