• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        细胞周期的检测分析

        别名:cell cycle,细胞周期 ,细胞周期实验,细胞周期检测

        最新修订时间:

        简介

        细胞周期的检测分析,是利用核酸染料可以与 DNA 分子特异性结合的特性,用流式细胞仪分析细胞周期各个阶段的 DNA 分布状态,从而计算出各个期的百分含量。

        原理

        细胞周期的检测分析的基本过程可分为如下几步:
        1. 收集待检测细胞,用 2 ml PBS 重悬,1000 r/min 离心 5 min,弃上清。细胞数要求每组 1 X 106 个细胞。
        2. 加入 1 ml PBS 和 2 ml 无水乙醇,重悬,用封口膜封口。4 °C 下可保存 1 h 至 15 d。
        3. 将待检测样品 1000 r/min 离心 5 min,弃固定液,再用 2 ml PBS,1000 r/min 离心 5 min,洗涤 2 次。弃上清,用 400 μl PBS 重悬细胞。
        4. 加入 50 μl 的 PI 和 50 μl 的 RNase,室温避光孵育 30 min。
        5. 上流式细胞仪检测。

        材料与仪器

        器材:

        流式细胞仪、离心机

        试剂:

        ① PI 400 μg/ml,PI 溶于水,4 ℃ 避光保存;

        ② RNase 试剂。配制成 1 mg/ml,RNase 溶于 PBS,分装,-20 ℃ 保存。

        ③ 无水乙醇、PBS
        耗材:
        流式专用样品管、玻璃管、离心管、封口膜

        步骤

        细胞周期的检测分析的基本过程可分为如下几步:
        1. 收集待检测细胞,用 2 ml PBS 重悬,1000 r/min 离心 5 min,弃上清。细胞数要求每组 1 X 106 个细胞。
        2. 加入 1 ml PBS 和 2 ml 无水乙醇,重悬,用封口膜封口。4 °C 下可保存 1 h 至 15 d。
        3. 将待检测样品 1000 r/min 离心 5 min,弃固定液,再用 2 ml PBS,1000 r/min 离心 5 min,洗涤 2 次。弃上清,用 400 μl PBS 重悬细胞。
        4. 加入 50 μl 的 PI 和 50 μl 的 RNase,室温避光孵育 30 min。
        5. 上流式细胞仪检测。

        注意事项

        1. 样品制备过程要轻柔,固定液浓度不宜过高,以防细胞聚集成团。
        2. 仪器要用荧光微球校准,把 CV 值调节到最佳,CV 值越小,DNA 分析的数据结果就更准确。
        3. 样品检测中样品的流速不要太大,一般控制在每秒 100 个细胞。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序