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        AKP染色鉴定小鼠干细胞

        相关实验:小鼠胚胎干细胞的鉴定

        最新修订时间:

        简介

        正常情况下,ES 细胞的 AKP 标记呈阳性;而当饲养条件不合适造成 ES 细胞发生分化时,AKP 标记呈阴性。AKP 染色常用染料是固蓝、固绿 B 盐或萘酚等,检测 ICM、ES、PGC 细胞反应为阳性。

        材料与仪器

        器材:

        ① 载玻片
        ② 染缸

        试剂:

        ① PBS

        ② BCIP/NBT 碱性磷酸酯酶显色试剂盒(碧云天)

        步骤

        AKP 染色鉴定小鼠干细胞的基本过程为:

        1. 用含 Ca2+和 Mg2 的 PBS 洗 3 遍。

        2. 4% 多聚甲醛固定 30 分钟以上。

        3. PBS 冲洗 3 次。

        4. 按比例加入各溶液 [碱性磷酸酯酶显色缓冲液 3 ml+BCIP 溶液(300x)10 μl+NBT 溶液(150x)20 μl+BCIP/NBT 染色工作液 3.03 ml],混匀后配成 BCIP/NBT 染色工作液,确保能充分覆盖样品。

        5. 室温避光孵育 5~30 分钟或更长时间(可长达 24 小时),直至显色至预期深浅。

        6. PBS 洗 3 遍后,存放于 PBS 溶液中保存,拍照。

        来源:丁香实验

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